[發(fā)明專利]一種IgG樣三功能抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110283273.1
• 申請(qǐng)日: 2021-03-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113061191B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉夢(mèng)元;劉喜元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 托比康爾生物科技（武漢）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K19/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K19/00;C12N15/62;A61K39/395;A61K47/64;A61P37/02
• 代理公司: 重慶市信立達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

本發(fā)明涉及基因工程抗體領(lǐng)域，公開(kāi)了一種IgG樣三功能抗體，所述IgG樣三功能抗體為ILTsAb，所述ILTsAb由抗TNF?α抗體、抗ED?B抗體、人IgG CH3區(qū)及20T小肽依次串聯(lián)連接成為單體后再同源二聚化而成；本發(fā)明還公開(kāi)了編碼基因、表達(dá)載體和宿主細(xì)胞；本發(fā)明還公開(kāi)了復(fù)性方法和應(yīng)用。本發(fā)明克服了抗TNF?α單鏈抗體的單價(jià)結(jié)合抗原及缺乏炎癥組織特異性的不足，可有效提高療效，降低副作用，發(fā)揮抗炎作用，并大大提高了該抗體的血漿半衰期。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程抗體領(lǐng)域，具體涉及一種IgG樣三功能抗體(ILTsAb)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤壞死因子(TNF-α)及其受體介導(dǎo)的信號(hào)通路在多種自身免疫性疾病如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)、Crohn’s病、牛皮癬型關(guān)節(jié)炎(PsA)、強(qiáng)直性脊柱炎(AS)等疾病中發(fā)揮著重要作用，抗TNF-α生物制劑是治療上述疾病最為有效的藥物之一。自上世紀(jì)末，美國(guó)FDA相繼批準(zhǔn)了4個(gè)抗TNF-α抗體工程藥物，分別為Infliximab、Adalimumab、Certolizumab pegol和Golimumab，這四種抗體見(jiàn)證了過(guò)去10多年來(lái)從鼠源抗體、人-鼠嵌合抗體、人源化抗體、噬菌體展示技術(shù)篩選人源抗體到轉(zhuǎn)基因小鼠生產(chǎn)全人抗體的發(fā)展過(guò)程，逐漸解決了治療性抗體的免疫原性問(wèn)題。但上述抗體具備一個(gè)共性的問(wèn)題，即缺乏針對(duì)炎癥組織的特異性。炎癥組織是機(jī)體自身免疫發(fā)生和病理?yè)p傷的場(chǎng)所，藥物有效分布和保留于炎癥組織是治療的關(guān)鍵。目前的研究表明，治療性單抗在RA的炎癥滑膜中分布量極小，需要大劑量才能達(dá)到一定療效，而大量的抗體分布于正常組織會(huì)抑制TNF-α的免疫防御作用，進(jìn)而增加RA患者發(fā)生嚴(yán)重感染(結(jié)核)和惡性腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)，這也是近十幾年來(lái)全世界風(fēng)濕學(xué)家在抗TNF-α治療上最為關(guān)注的安全問(wèn)題。因此，下一代治療自身免疫病的生物治療劑應(yīng)該更加注重其組織特異性，增進(jìn)療效的同時(shí)減少副作用。

人纖維連接蛋白(FN)是機(jī)體最為豐富的胞外基質(zhì)(ECM)之一，F(xiàn)N的前體RNA(pre-mRNA)對(duì)外顯子進(jìn)行選擇性的拼接，可產(chǎn)生不同亞型的FN，保留III型重復(fù)單位額外域B(extro-domain B，ED-B)的FN稱為B-FN。研究表明，B-FN是成熟個(gè)體在病理?xiàng)l件下發(fā)生胞外基質(zhì)重構(gòu)的產(chǎn)物，其表達(dá)具有高度的組織特異性，B-FN在正常成年的個(gè)體組織中不表達(dá)，在炎癥組織中卻豐富表達(dá)。在RA中，B-FN表達(dá)于血管翳(pannus)，pannus具有腫瘤樣生長(zhǎng)的特征，是一個(gè)高度血管化的肉芽組織，從關(guān)節(jié)滑膜延伸并浸入到關(guān)節(jié)腔，含有大量的成纖維細(xì)胞及其合成的ECM，是造成關(guān)節(jié)纖維炎性增生，骨和軟骨破壞的病理組織，同時(shí)也是TNF-α合成最豐富的組織，這說(shuō)明B-FN是靶向自身免疫炎癥的良好抗原。新生兒Fc受體(FcRn)最早發(fā)現(xiàn)于哺乳動(dòng)物的一個(gè)與IgG Fc相互作用的受體蛋白。FcRn在成熟的個(gè)體中廣泛的表達(dá)，其與抗體工程藥物相關(guān)的第一個(gè)功能特點(diǎn)就是特異性結(jié)合并雙向轉(zhuǎn)運(yùn)IgG，可避免IgG在溶酶體中降解，可維持血漿中IgG的相對(duì)穩(wěn)定，使IgG血漿半衰期達(dá)到19天。FcRn與生物制藥相關(guān)的另一個(gè)重要生理功能是它表達(dá)于近端腎小管上皮細(xì)胞，可通過(guò)相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)作用促進(jìn)IgG的重吸收，避免IgG通過(guò)腎小球的濾過(guò)作用而丟失。由此可見(jiàn)，F(xiàn)cRn在延長(zhǎng)生物技術(shù)藥物血漿半衰期上具有重要作用。

因此，發(fā)明人在上述技術(shù)背景下研發(fā)了一種IgG樣三功能抗體及其應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上問(wèn)題，本發(fā)明提供一種IgG樣三功能抗體及其應(yīng)用，本發(fā)明克服了抗TNF-α單鏈抗體的單價(jià)結(jié)合抗原及缺乏炎癥組織特異性的不足，可有效提高療效，降低副作用，發(fā)揮抗炎作用，并大大提高了該抗體的血漿半衰期。

為解決以上技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種IgG樣三功能抗體，所述IgG樣三功能抗體為ILTsAb，所述ILTsAb由抗TNF-α抗體、抗ED-B抗體、人IgG CH3區(qū)及20T小肽依次串聯(lián)連接成為單體后，再通過(guò)IgG CH3區(qū)介導(dǎo)兩個(gè)單體分子的同源二聚化并形成二硫鍵連接而成；所述20T小肽是一個(gè)能與人新生兒受體(FcRn)結(jié)合的20個(gè)氨基酸小肽。