[發明專利]一種IgG樣三功能抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110283273.1
• 申請日: 2021-03-17
• 公開（公告）號: CN113061191B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 劉夢元;劉喜元
• 申請（專利權）人: 托比康爾生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/395;A61K47/64;A61P37/02
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 包曉靜

1.一種IgG樣三功能抗體，其特征在于，所述IgG樣三功能抗體為ILTsAb，所述ILTsAb由抗TNF-α抗體、抗ED-B抗體、人IgG CH3區及20T小肽依次串聯連接成為單體后，再通過IgGCH3區介導兩個單體分子的同源二聚化并形成二硫鍵連接而成；所述20T小肽是一個能與人新生兒受體結合的20個氨基酸小肽；所述抗TNF-α抗體的氨基酸序列為：

QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYADDFKEHFAFSLETSASTVFLQINNLKNEDTATYFCARERGDAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSSIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCTASQSVSNDVVWYQQKPGQSPKMLMYSAFNRYTGVPDRFTGRGYGTDFTFTISSVQAEDLAVYFCQQDYNSPRTFGGGTKLEIK；

所述抗ED-B抗體的氨基酸序列為：

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYYASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQTGRIPPTFGQGTKVEIKGDGSSGGSGGASTGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFSMSWVRQAPGKGLEWVSSISGSSGTTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPFPYFDYWGQGT LVTVSS；

所述20T小肽的氨基酸序列為：HGNYFLSGHFGGLYPVQGSV。

2.根據權利要求1所述的一種IgG樣三功能抗體，其特征在于，所述抗TNF-α抗體可變區為VH1和VL1，所述抗ED-B抗體可變區為VH2和VL2；所述ILTsAb的串聯連接順序為VH1-VL2-VH2-VL1-CH3-20T，其中VH1與VL2之間、VH2與VL1之間均用(GGGGS)₂作為連接肽，VL2與VH2之間用(GGGGS)₄作為連接肽，VL1與CH3之間引入IgG的鉸鏈區序列以使兩個抗原結合臂能夠自由的伸展，所述IgG的鉸鏈區序列為：EPKSCDKTHTCPPC，CH3與20T之間用GGGGS作為連接肽。

3.根據權利要求2所述的一種IgG樣三功能抗體，其特征在于，所述抗TNF-α抗體為抗TNF-α的單鏈抗體片段、Fab片段和單域抗體片段中的任意一種；所述抗ED-B抗體為抗ED-B的單鏈抗體片段、Fab片段和單域抗體片段中的任意一種。

4.根據權利要求3所述的一種IgG樣三功能抗體，其特征在于，所述ILTsAb的氨基酸序列見SEQ ID NO:1。

5.編碼權利要求1-4中任意一項所述ILTsAb的核酸分子。

6.根據權利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的DNA序列見SEQ IDNO:2。

7.一種體外復性權利要求1-4中任意一項所述ILTsAb的方法，其特征在于，具體方法如下：選用硼酸鹽緩沖液為復性液，通過緩慢復性的方法逐漸去除變性劑尿素，使變性的IgG樣三功能抗體單體重新折疊成具有空間結構的單體，然后通過CH3同源二聚化形成具有生物學活性的ILTsAb。

8.權利要求1-4中任意一項所述的ILTsAb在制備治療或預防自身免疫性疾病的產品中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述疾病包含類風濕關節炎、牛皮癬、Crohn’s病、強直性脊柱炎、炎癥性腸炎；所述產品為藥物。