[發(fā)明專利]一種基于MIRA熒光法快速檢測PCV3病毒的引物和探針

在審

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• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN112961941A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 涂健;趙艷利;祁克宗;宋祥軍;劉紅梅;邵穎;楊侃侃;牛香鵬;李雅男
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 安徽申策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34178
• 代理人: 程艷梅

本發(fā)明涉及PCV3病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，且公開了一種基于MIRA熒光法快速檢測PCV3病毒的引物和探針，包括四對引物和一個探針，四對引物和一個探針的基因序列具體如下：第一對引物：PCV3?MIRA?F1：5'?GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT?3'；PCV3?MIRA?R1：5'?GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA?3'；本發(fā)明解決了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)最后需要核酸膠電泳呈現(xiàn)結(jié)果，耗時較長，實(shí)時熒光定量PCR需要昂貴的熱循環(huán)儀，對精密儀器依賴度高，需要專業(yè)的技術(shù)人員操作和判讀結(jié)果，在基層和現(xiàn)場的檢測應(yīng)用受到很大限制，等溫核酸技術(shù)中的LAMP方法需要多對引物，對靶基因的要求高，容易出現(xiàn)假陽性的問題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及PCV3病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種基于MIRA熒光法快速檢測PCV3病毒的引物和探針。

背景技術(shù)

現(xiàn)已有的檢測PCV3的方法包括病毒分離鑒定，血清學(xué)檢測，分子生物學(xué)試驗等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前常用的檢測方法包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，實(shí)時熒光定量PCR，環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)等方法，然而聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)最后需要核酸膠電泳呈現(xiàn)結(jié)果，耗時較長；實(shí)時熒光定量PCR縮短了檢測時間，但需要昂貴的熱循環(huán)儀，對精密儀器依賴度高，需要專業(yè)的技術(shù)人員操作和判讀結(jié)果，在基層和現(xiàn)場的檢測應(yīng)用受到很大限制，整體實(shí)驗時間在1-2小時；等溫核酸技術(shù)中的LAMP方法克服了PCR技術(shù)需要昂貴的設(shè)備儀器等缺點(diǎn)，具有操作簡便，結(jié)果判斷簡單等優(yōu)點(diǎn)，但是需要多對引物，對靶基因的要求高，容易出現(xiàn)假陽性，且時間約在1小時。多酶恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)(MIRA)在常溫39℃20分鐘內(nèi)即可完成擴(kuò)增，操作簡便，特異性高，配備便攜式的恒溫?zé)晒鈾z測儀，在資源匱乏的邊遠(yuǎn)地區(qū)、試驗室條件不足的基層也可做到對豬圓環(huán)3型病毒的快速檢測。

發(fā)明內(nèi)容

(一)解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種基于MIRA熒光法快速檢測PCV3病毒的引物和探針，解決了上述背景技術(shù)中所存在的問題。

(二)技術(shù)方案

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種基于MIRA熒光法快速檢測PCV3病毒的引物和探針，包括四對引物和一個探針，四對引物和一個探針的基因序列具體如下：

第一對引物：

PCV3-MIRA-F1：5'-GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT-3'；

PCV3-MIRA-R1：5'-GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA-3'；

第二對引物：

PCV3-MIRA-F2：5'-GGGGGATTACCTCGAGATTGGCGAAGATT-3'；

PCV3-MIRA-R2：5'-GTTTACCCAACCCCATCACCCCGCAAAAA-3'；

第三對引物：

PCV3-MIRA-F3：5'-CTTCGGGTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAG-3'；

PCV3-MIRA-R3：5'-CCTGTCCCCAATTCTCAGCAATTCATCAAATGGA-3'；

第四對引物：

PCV3-MIRA-F4：5'-AGATTCCTCTTCGGGTACCAGATCGGATCTTCAA-3'；

PCV3-MIRA-R4：5'-GTTTACCCAACCCCATCACCCCGCAAAA-3'；

探針序列：