[發明專利]一種多菌靈半抗原、人工抗原及其免疫熒光層析檢測卡

有效

• 申請號: 202110278860.1
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN112986564B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 湯永平;梁展鵬;劉衛;林志欣;羊曉珊
• 申請（專利權）人: 廣州敏捷生物技術有限公司
• 主分類號: C07D235/30
• 分類號: C07D235/30;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

1.一種多菌靈半抗原，其特征在于，多菌靈半抗原的結構式為式Ⅳ：

式Ⅳ；

所述的多菌靈半抗原通過下述步驟制得的：

（1）將化合物Ⅰ與化合物Ⅱ按照摩爾比（2~2.5）:1溶于甲苯/水的混合溶液中，采用酸性物質調節pH3~4，60~70℃反應6 h以上，獲得化合物Ⅲ；

（2）將化合物Ⅲ溶于甲醇中，加入丁二酸酐，所述的丁二酸酐與式Ⅲ所示的化合物的摩爾比為（2~3）：1；在40~50℃反應12 h以上，獲得多菌靈半抗原化合物Ⅳ；

所述的式Ⅰ~Ⅳ如下：

。

2.權利要求1所述的多菌靈半抗原的制備方法，其特征在于，所述的多菌靈半抗原通過下述步驟制得的：

（1）將化合物Ⅰ與化合物Ⅱ按照摩爾比（2~2.5）:1溶于甲苯/水的混合溶液中，采用酸性物質調節pH3~4，60~70℃反應6 h以上，獲得化合物Ⅲ；

（2）將化合物Ⅲ溶于甲醇中，加入丁二酸酐，所述的丁二酸酐與式Ⅲ所示的化合物的摩爾比為（2~3）：1；在40~50℃反應12 h以上，獲得多菌靈半抗原化合物Ⅳ；

所述的式Ⅰ~Ⅳ如下：

。

3.根據權利要求2所述的多菌靈半抗原的制備方法，其特征在于，步驟1）中，所述的酸性物質為濃鹽酸。

4.根據權利要求2所述的多菌靈半抗原的制備方法，其特征在于，步驟1）中，所述的混合溶液為等體積比甲苯和水。

5.一種多菌靈人工抗原，其特征在于，是采用權利要求1所述的多菌靈半抗原與載體蛋白偶聯得到，多菌靈人工抗原的結構如式V所示：

式V；

所述的載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清蛋白或人血清白蛋白或血藍蛋白。

6.一種多菌靈單克隆抗體，其特征在于，是采用權利要求1項所述的多菌靈半抗原與載體血藍蛋白偶聯為免疫原，與等體積弗氏佐劑乳化后，免疫小鼠，取免疫后小鼠脾細胞與SP20細胞融合，融合后的細胞在HAT培養基中篩選，5天后以完全培養基替換HAT培養基進行培養，用ELISA對細胞上清進行檢測，將檢測結果為強陽性的孔內細胞進行有限稀釋法克隆培養，均呈陽性的孔內細胞即為分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞，將雜交瘤細胞放大培養后，接種至小鼠腹腔，產生含抗體的腹水，用辛酸-硫酸銨沉淀法純化腹水，即可得到高純度、高特異性的多菌靈單克隆抗體。

7.一種多菌靈免疫熒光層析檢測卡，包括PVC底板，所述的PVC底板上從左至右依次銜接有吸水紙墊、反應膜、結合墊、樣品墊，其特征在于，所述的反應膜設有橫向平行排布的檢測T線和質控C線，所述的檢測T線上包被有權利要求書5所述的多菌靈人工抗原，所述的質控C線包被有兔IgG；所述的結合墊上噴涂有多菌靈單克隆抗體-熒光微球標記物和羊抗兔IgG-熒光微球標記物的混合物。

8.據權利要求7所述的多菌靈免疫熒光層析檢測卡，其特征在于，所述的多菌靈人工抗原的載體為牛血清白蛋白或卵清蛋白或人血清白蛋白。

9.根據權利要求7所述的多菌靈免疫熒光層析檢測卡，其特征在于，所述的反應膜通過下述步驟制得的：將多菌靈人工抗原加到包被緩沖液中混合均勻劃膜到反應膜的檢測T線，將兔IgG加到包被緩沖液中混合均勻劃膜到反應膜的質控C線。

10.根據權利要求7所述的多菌靈免疫熒光層析檢測卡，其特征在于，所述的結合墊是將多菌靈單克隆抗體-熒光微球標記物和羊抗兔IgG-熒光微球標記物按照體積比20~80:1混合均勻，按8μl/cm、0.02 MPa噴至剪裁后的玻璃纖維上，37℃16h~18h得到的。