[發明專利]一種多菌靈半抗原、人工抗原及其免疫熒光層析檢測卡

有效

• 申請號: 202110278860.1
• 申請日: 2021-03-16
• 公開（公告）號: CN112986564B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 湯永平;梁展鵬;劉衛;林志欣;羊曉珊
• 申請（專利權）人: 廣州敏捷生物技術有限公司
• 主分類號: C07D235/30
• 分類號: C07D235/30;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

本發明公開了一種多菌靈半抗原、人工抗原及其免疫熒光層析檢測卡與檢測方法，其結構式為：，該半抗原不僅具有活性基團，同時在一個半抗原分子結構中還具有兩個多菌靈分子的特征結構，突出半抗原在載體蛋白上的空間位置和抗原決定簇，有效的增強了識別位點，提高了小分子半抗原的免疫原性；且使用半抗原制得的人工抗原及單克隆抗體，可快速、便捷地實現多菌靈的定量檢測，本發明屬于免疫化學技術領域。

技術領域

本發明屬于免疫化學技術領域，具體涉及一種多菌靈半抗原、人工抗原及其免疫熒光層析檢測卡。

背景技術

多菌靈又名棉萎靈或苯并咪唑44號，是一種良好的廣譜、高效、內吸性殺菌劑，對子囊菌、擔子菌以及半知菌類中的大多數病原菌都有效，廣泛應用于農作物、中草藥、煙草等的病害防治工作中。多菌靈化學性質穩定，能被植物的種子、根和葉吸收，殘效期較長，對人、畜等有一定的毒性。多菌靈化學結構式如下：

目前，國內外對多菌靈殘留的檢測方法主要有高效液相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜法。儀器方法具備檢測靈敏度高、特異性強等優勢，但是檢測樣本前處理繁瑣、耗時，樣品還需提取和凈化處理，同時儀器檢測方法需要昂貴的大型儀器和設備，配備專業的檢測技術人員進行操作和管理，無法進行現場大規模檢測，時效性差，難以推廣。

免疫層析技術是一種將免疫檢測技術、色譜層析技術和免疫標記技術相結合的固相膜免疫分析方法。這種技術，通常借助選用不同的生物標記物獲取不同強度的測量信號來進行結果分析。納米粒子一般是顆粒尺寸在100-500nm范圍的超微粒子。與其他粒子相比，納米粒子具有大的表面積、其光、熱、磁敏感特性和表面的穩定性較高。同時納米材料用于生物分析，可以大大改善標記物的性能，顯著提升現有分析方法的靈敏度和特異性，其在抗原抗體的標記上具有很大的應用潛能。然而得到高親和力高特異性的單克隆抗體是免疫檢測的前提，其中人工抗原的合成是其中重要的一步。

由于多菌靈是小分子物質（分子量MW1000Dal），本身不具有誘導機體產生抗體的能力，需要和蛋白載體偶聯后，才能具有免疫原性。但多菌靈結構中沒有可以直接利用的活性基團如-COOH、-NH₂、-OH或-SH₂等，因此，要實現多菌靈和載體蛋白的偶聯，首先要進行多菌靈半抗原的設計和合成。

發明內容

針對上述問題，本發明的第一個目的是提供具有兩個多菌靈分子的特征結構，使得半抗原在載體蛋白上的空間位置更加突出，有效的增強了識別位點，提高了小分子半抗原的免疫原性和免疫反應性。

本發明的第二個目的是提供一種用于免疫熒光層析技術的多菌靈人工抗原及其抗體。

本發明的第三個目的是提供靈敏度高，可快速、便捷地實現多菌靈檢測的免疫熒光層析檢測卡。

本發明的第四個目的是提供多菌靈定量檢測試劑卡的檢測方法。

為解決上述技術問題為此，本發明提供的第一個技術方案是這樣的：

一種多菌靈半抗原，多菌靈半抗原的結構式為：

式Ⅳ。

上述的多菌靈半抗原的制備方法，所述的多菌靈半抗原通過下述步驟制得的：

1）將化合物Ⅰ與化合物Ⅱ按照摩爾比（2~2.5）:1溶于甲苯/水的混合溶液中，采用酸性物質調節pH3~4，60~70℃反應6 h以上，獲得化合物Ⅲ；

2）將化合物Ⅲ溶于甲醇中，加入丁二酸酐，所述的丁二酸酐與式Ⅲ所示的化合物的摩爾比為（2~3）：1；在40~50℃反應12 h以上，獲得多菌靈半抗原化合物Ⅳ；

所述的式Ⅰ~Ⅳ如下：

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