[發明專利]一種強力枇杷露指紋圖譜的檢測方法及其指紋圖譜

有效

• 申請號: 202110276946.0
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113009040B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 樊文研;黎強;陳宇;龐小蓮;甘洋縈;丘一仙;唐明華;徐夢;盧森華
• 申請（專利權）人: 玉林市食品藥品檢驗檢測中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 北京律譜知識產權代理有限公司 11457
• 代理人: 莫錫暉

1.一種強力枇杷露指紋圖譜的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)色譜條件：

色譜柱：ACQUITYUPLCHSST3，1.8μm，2.1mm×100mm；流動相：乙腈-0.1mol/L磷酸二氫銨溶液V/V，梯度洗脫；體積流量：0.25mL/min；測定波長：210nm；柱溫：30℃；進樣體積：1μL，梯度洗脫程序如下：

2)溶液的制備：

①混合對照品溶液：精密稱取鹽酸罌粟堿對照品11.89mg，那可丁對照品11.45mg、蒂巴因對照品12.35mg、嗎啡對照品10.95mg、磷酸可待因對照品11.07mg，分別置20mL量瓶中，加含0.5％甲酸的甲醇溶液適量，超聲使溶解，并用含0.5％甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得各對照品的單一對照品溶液；再分別精密量取上述單一對照品溶液各1.0mL，置同一10mL量瓶中，并用甲醇定容，搖勻，即得混合對照品溶液；

②供試品溶液：精密量取供試品10ml，用氨試液調節pH值至10-11，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次25ml，合并正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至5ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；

3)方法學考察：

①精密度試驗：分別精密吸取步驟2)同一供試品溶液，按步驟1)色譜條件連續進樣6次，記錄色圖譜，以3號峰作為參照峰計算樣品中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積；

②重復性試驗：精密量取樣品6份，每份10ml，按步驟2)的方法制備供試品溶液，按照步驟1)色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖，以3號峰作為參照峰計算樣品中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積；

③穩定性試驗：取步驟2)供試品溶液，分別于室溫下放置1、2、4、6、12、24h后按步驟1)色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以3號峰作為參照峰計算樣品中各共有峰的相對保留時間和相對峰面積；

4)HPLC特征指紋圖譜的建立與分析：

①HPLC特征指紋圖譜的生成：精密量取多批次強力枇杷露樣品各10ml，分別按步驟2)方法制備供試品溶液，然后按步驟1)色譜條件進樣測定，記錄色譜圖；將多批次強力枇杷露樣品的圖譜及數據在色譜數據系統中生成后綴為.aia的文件，將文件數據導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”2004A版中，建立多批次強力枇杷露HPLC疊加色譜圖，以樣品編號S1的圖譜作為參照圖譜，并采用中位數法，設置時間窗寬度為0.1min，進行多點校正和自動譜峰匹配，系統根據強力枇杷露樣品的共有模式生成對照指紋圖譜SR；

②相似度評價：以對照指紋圖譜SR為參照，進行12批強力枇杷露樣品的整體相似度評價；

③共有峰的指認及相關分析：在多批次強力枇杷露樣品圖譜中共標定了13個共有峰，通過與混合對照品溶液的HPLC圖，按步驟1)項下色譜條件進樣對比，指認了3號峰為嗎啡、5號峰為可待因、8號峰為蒂巴因、11號峰為罌粟堿、13號峰為那可丁，選用嗎啡，即嗎啡峰，作為參照峰S，計算12批強力枇杷露樣品中13個共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD；

5)化學計量學分析：

①聚類分析：選擇多批次強力枇杷露樣品的13個共有特征峰，將其峰面積標準化，組成12×13階原始數據矩陣，采用IBMSPSS19.0軟件，聚類方法選用組間連接，度量標準選用平方歐式距離，進行系統聚類分析；

②主成分分析：選擇多批次強力枇杷露樣品的13個共有特征峰，將其峰面積標準化，組成12×13階原始數據矩陣，采用IBMSPSS19.0軟件進行因子分析，表明前3個主成分因子即代表13個共有特征峰的大部分信息，主成分因子1、2、3作為強力枇杷露的評價指標，以主成分因子為變量繪制公因子碎石圖；選擇多批次強力枇杷露樣品的13個共有特征峰，將其峰面積標準化，建立強力枇杷露制劑質量評價模型，以X₁、X₂、X₃代表3個主成分來作為12批強力枇杷露樣品成分所表達的信息。

2.根據權利要求1所述的一種強力枇杷露指紋圖譜的檢測方法，其特征在于：步驟2)所述的對照品，由中國食品藥品檢定研究院提供，其中鹽酸罌粟堿的純度99.9％，那可丁的純度99.9％，蒂巴因的純度100％，嗎啡的純度99.1％、磷酸可待因的純度97.5％。

3.根據權利要求1所述的一種強力枇杷露指紋圖譜的檢測方法，其特征在于：步驟2)所述的超聲，功率是500W，頻率是40kHz。