[發明專利]定量檢測人血漿樣本中抗病毒藥物含量的方法

在審

• 申請號: 202110274555.5
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113092634A
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 楊青青;孔子青;劉鵬云;劉華芬
• 申請（專利權）人: 杭州凱萊譜精準醫療檢測技術有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發明涉及一種定量檢測血漿樣本中抗病毒藥物含量的方法，所述方法包括如下步驟：(1)將待測血漿樣本在50?60℃條件下滅菌20?40min；(2)將滅菌處理的待測血漿樣本與含有內標的蛋白沉淀液混合，渦旋后離心，將上清液稀釋得到待檢測液；(3)采用高效液相色譜串聯質譜系統對待檢測液進行檢測和分析。本發明通過一種簡單的前處理方法，即可同時準確的檢測出人血漿中拉米夫定、齊多夫定、依非韋倫、奈韋拉平、洛匹那韋、利托那韋、阿巴卡韋和替諾福韋的濃度，為臨床診斷和治療提供依據。

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，主要涉及一種定量檢測人血漿樣本中抗病毒藥物含量的方法。

背景技術

艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，從1981年美國發現首例艾滋病至今，全球約有7570萬人感染艾滋病，約有3270萬人死于與艾滋病有關的疾病，是威脅全人類的重大傳染病。從1987年第一種抗病毒藥物齊多夫定(AZT)問世，到現在國際上共有六大類30多種藥物，包括核苷類反轉錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷類反轉錄酶抑制劑(NNRTI)、蛋白酶抑制劑(PI)、整合酶抑制劑(INSTI)、融合抑制劑(FI)及CCR5抑制劑等。目前針對艾滋病，高效抗反轉錄病毒治療(HARRT)是唯一有效的治療手段，通過2個NRTI和1個NNRTI或2個NRTI和1個PI聯合用藥，大大加強藥物的抗病毒作用。但幾乎所有的抗病毒藥物都會引起相應的不良反應，用藥過量會導致嚴重的不良反應，藥量不足，持續的藥物濃度過低會影響治療效果，并且會誘使HIV(humanimmunodeficiency virus)產生耐藥性。雖然目前對于藥物的使用有對應的推薦用量，但病人的個體差異，包括年齡、體重、疾病狀況和對于藥物吸收和消除的差異，合并用藥引起的藥物間相互作用以及用藥途徑等，都會影響治療效果。因此，對于每一個治療對象體內的藥物濃度進行監測和控制尤為重要。

目前在臨床上應用最多的抗病毒藥物濃度的檢測方法是高效液相色譜法和液質聯用法。高效液相色譜法檢測靈敏度有限，前處理一般需要進行富集才可以達到檢測靈敏度的需求，樣本處理流程復雜且樣本量要求高。液質聯用法是將高效液相色譜儀與質譜儀聯合起來的檢測技術，樣本中的分析物在液相系統進行分離，然后進入質譜系統，質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分開，經檢測器得到質譜信號。該技術的靈敏度高，準確度好，兼具色譜和質譜的雙重分離效果，可以一次檢測多種藥物濃度。同時，引入同位素內標進行校準，可以大大降低基質效應，檢測準確度高。但由于技術的限制，目前存在的液質聯用方法大多只能檢測一種藥物濃度。

公開號為CN109900819A的專利公開了一種UPLC/MS-MS聯用檢測人血清中替諾福韋的方法。該方法的前處理過程主要是將人血清樣本進行蛋白沉降，離心后取上清進入液質聯用儀進行分析。但是該方法只能檢測一種藥物濃度，臨床應用范圍有限。

公開號為CN110715990A的專利公開了一種同時檢測血漿中ACC007、拉米夫定和替諾福韋的方法。該方法的前處理過程主要是將血漿樣本進行蛋白沉降，離心后取上清進行稀釋，然后進入液質聯用儀進行分析。但是該方法每次也只能檢測三種藥物濃度，無法同時適用于不同的聯合用藥方案。