[發明專利]鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記、引物、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202110274546.6
• 申請日: 2021-03-15
• 公開（公告）號: CN113774122B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 殷戰;翟剛;賈景怡;舒婷婷;賀江燕;婁氣永;石闖
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 武漢卓越志誠知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42266
• 代理人: 胡婷婷

本發明提供了一種鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記、引物、試劑盒及應用。該鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記為從黃河鯉基因組信息中篩選到的雄性特異序列，其存在于黃河鯉的雄性遺傳性特征區域(即相當于性別遺傳決定型Y的表征)，而不出現于雌性黃河鯉基因組中(即對應于XX性別遺傳型)。并針對該鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記設計了相應的特異性引物和試劑盒，并基于上述引物和試劑盒，建立了用于黃河鯉遺傳性別鑒定的PCR技術，可以快速、準確區分黃河鯉的遺傳性別；該鑒別體系可用于對不同生長階段和不同群體的黃河鯉性別鑒定和篩選，對研究黃河鯉性別決定和分化機制、實現其性別控制具有重要意義。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及一種鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記、引物、試劑盒及應用。

背景技術

魚類等水產動物的養殖已成為人類獲取動物蛋白的一個主要途徑，魚類養殖對世界動物蛋白的持續供給做出了至關重要的貢獻。魚類中廣泛存在個體大小和外部形態、顏色特征的兩性差異，稱為魚類的兩性異形或者性別二態性。不少魚類在個體大小等重要生產性狀上表現出顯著的兩性異形，而這種生產性狀的經濟價值與性別密切相關。

例如：黃河鯉雌性的生長速度顯著快于雄性(尤其是幼年期后)，使得開發黃河鯉的單性育種與單性養殖技術具有較為重要的經濟價值。盡管個體在性別上存在大小差異，但在性腺發育成熟之前，黃河鯉的雌魚和雄魚卻很難從外部形態上加以區分，胚胎和幼體階段雌雄魚形態上更是難以區別，這給其單性育種、養殖以及對研究黃河鯉性別決定和分化機制等相關的遺傳學基礎研究帶來很大的阻礙。

隨著分子生物學技術的發展，基于DNA多態性的分子標記被開發出來，如：限制性片段長度多態性(RFLP)、隨機擴增多態性DNA(RAPD)、擴增片段長度多態性(AFLP)、微衛星標記(microsatellite)和單核苷酸多態性(SNP)等等。一些魚類的性別特異分子標記已經被開發出來，而不同物種其基因組DNA序列結構不同，其不能對不同種的遺傳性別進行鑒定，只能針對不同物種分別進行開發。迄今為止，可以鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記國內外都未見報道。

有鑒于此，有必要設計一種改進的鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記、引物、試劑盒及應用，以解決上述問題。

發明內容

為解決現有依據形態學鑒定方式存在的外觀形態難以鑒定區分黃河鯉雌雄性別的問題，本發明的目的在于提供一種鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記、引物、試劑盒及應用，有助于快速準確鑒別黃河鯉遺傳性別，為開展黃河鯉單性育種工作以及生殖發育與性別分化遺傳學研究建立基礎。

為實現上述發明目的，本發明提供了一種鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

作為本發明的進一步改進，所述鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記為黃河鯉雄性特異性序列，其存在于黃河鯉的雄性遺傳性特征區域，但在雌性黃河鯉的基因組中缺失。

為實現上述發明目的，本發明還提供了一種用于檢測上述鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記的引物。所述引物針對所述鑒別黃河鯉遺傳性別的分子標記的核苷酸序列進行設計，包括上游引物和下游引物；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

所述下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

作為本發明的進一步改進，所述引物的檢測過程為：利用所述引物對待測黃河鯉基因組DNA進行PCR擴增，并檢測擴增片段的長度；

當擴增片段為一條1209bp的條帶時，所述待測黃河鯉含有具有SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列的雄性遺傳性特征區域，鑒別為遺傳性別為雄性的黃河鯉；

當沒有出現擴增條帶時，所述待測黃河鯉鑒別為遺傳性別為雌性的黃河鯉。