[發明專利]野化培訓大熊貓免疫適應的分子標記評估方法

有效

• 申請號: 202110272777.3
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN112725471B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 黃炎;楊苗;凌珊珊;沈海波;吳虹林;何鳴;張修月
• 申請（專利權）人: 中國大熊貓保護研究中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都佳劃信知識產權代理有限公司 51266
• 代理人: 史姣姣

本發明提供了一種野化培訓大熊貓免疫適應的分子標記評估方法，利用適應良好的野化培訓大熊貓和圈養大熊貓之間顯著差異表達的先天性免疫和適應性免疫基因作為Marker，通過實時熒光定量PCR，對待測樣品中的Marker進行定量檢測。從分子生物學層面上評估野化培訓大熊貓培訓期間的免疫適應情況。

技術領域

本發明涉及大熊貓野化培訓免疫適應評估方法，具體涉及野化培訓大熊貓免疫適應的分子標記評估方法。

背景技術

大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）是中國珍稀保護動物，同時也是世界生物多樣性保護的旗艦物種。隨著圈養大熊貓放歸野外的時機逐步成熟，野化培訓與放歸工作被提上日程。根據以往經驗，圈養的大型獸類個體直接放歸野外的存活率低。在放歸前對放歸動物進行必要的野化培訓，恢復其對野生環境的適應能力。中國大熊貓保護研究中心從2003年起正式開始了圈養大熊貓的野化培訓與放歸項目。在野外建立可監測的野化培訓圈，希望能夠培訓出具有適應野外環境的圈養大熊貓個體，進行野外放歸以復壯野生大熊貓小種群或者在大熊貓的歷史分布區進行重引入。

野化培訓的目的是增加大熊貓對野外環境的適應能力，包括免疫適應或增強對疾病的抵抗能力。但由于缺乏培訓大熊貓免疫特性的基本信息，缺乏監測手段和評估方法，無法對培訓大熊貓免疫健康進行評價和動態監測。雖然野化培訓大熊貓也有定期的健康體檢，但常規的體檢，不但指標少，而且反應的結果也相對滯后，不能及時準確全面地反應個體的免疫狀態，因此不能準確評估野化培訓大熊貓免疫狀態及其動態變化。

發明內容：

本發明為了評估野化培訓大熊貓的免疫適應狀態，提供了一種野化培訓大熊貓免疫適應的分子標記評估方法，從分子生物學層面上評估野化培訓大熊貓培訓期間的免疫適應情況。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案：

一種野化培訓大熊貓免疫適應的分子標記評估方法，利用適應良好的野化培訓大熊貓和圈養大熊貓之間顯著差異表達的先天性免疫和適應性免疫基因作為Marker，通過實時熒光定量PCR，對待測樣品中的Marker進行定量檢測。

本發明所述PCR擴增用到的專用引物：

Marker1：正向引物 5’-GTGCAAGGGGACAGACGAAC-3’

反向引物 5’-CTTGAGTGTTTGCAGCCTTGGA-3’；

Marker2：正向引物 5’-GATAGACCCACGACTGCACC-3’

反向引物 5’-GGTCTCGCCTCTTTCACAGG-3’；

Marker3：正向引物 5’-CTGGCTGTTGCTCTCTTGGC-3’

反向引物 5’-ATGGTTTCTGTTTCTCAGCCCTCTT-3’；

Marker4：正向引物 5’-GAAGGTAAAAGTCGGGCCTGG-3’

反向引物 5’-GGCAGTTTTCTGCAGCTACTGTATG-3’

Marker5：正向引物 5’-CTACGACACGTCCACCGACA-3’

反向引物 5’-CCAAAGCCGCTGTTCTGGATG-3’；

Marker6：正向引物 5’-CGAGTCACCTACCAGGGCTA-3’

反向引物 5’-TCCGTGAACTCTGACTCCGT-3’。

本發明所述實時熒光定量PCR擴增的內參基因的引物為：