[發明專利]一種沉積物石蠟切片的制作方法

有效

• 申請號: 202110271699.5
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN112816512B
• 公開（公告）日: 2022-11-01
• 發明（設計）人: 許玫英;王斌;黃友達
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: G01N23/2202
• 分類號: G01N23/2202;G01N23/2251
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 朱雙;劉明星

1.一種水體中沉積物石蠟切片的制作方法，其特征在于，包括以下步驟：

a. 取樣：用吸管插取沉積物柱狀樣本，然后用液氮速凍；

b. 固定：切開并移除吸管，加入體積分數2.5%戊二醛水溶液固定沉積物柱狀樣本，在黑暗中固定過夜；

c. 浸洗：用pH7.2的0.1M PBS溶液浸洗固定后的樣本三次，每次10 min；

d. 脫水：用梯度乙醇脫水處理，即依次用體積分數70%乙醇水溶液、體積分數85%乙醇水溶液、體積分數95%乙醇水溶液、無水乙醇、無水乙醇進行脫水處理，每次脫水處理30min；

e. 透明處理：先用體積比為1:1的二甲苯/乙醇處理30 min，再用二甲苯處理兩次，每次30 min；

f. 浸蠟包埋：用65oC的石蠟浸蠟處理三次，每次1 h，然后置于包埋盒中冰上包埋3 h；

g. 二次包埋：將包埋后的沉積物塊修整至切面小于8 mm × 8 mm，隨后重復一次步驟f的操作進行二次包埋；

h. 修塊及切片：將切面修整至小于 1 cm × 1 cm后，使用手動輪轉式病理切片機連續切片，切片厚度為25 μm，并在40oC水浴中進行展片，再用多聚賴氨酸包被的細胞爬片進行貼片；

i. 烤片：將切片豎直置于65oC烘箱中烤片；

j. 貼膜：將切片在體積分數0.3%的聚乙烯醇縮甲醛水溶液中蘸一下，然后用離子加濕器吹切片使其在表面形成一層微孔濾膜；

k. 脫蠟：用二甲苯脫蠟兩次，每次24 h；

l. 置換：用乙醇置換二甲苯兩次，每次4 h，然后用叔丁醇置換二甲苯2 h；

m. 用冷凍干燥機凍干樣本，然后進行掃描電鏡觀察沉積物中的微生物。