[發明專利]一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法在審
| 申請號： | 202110271359.2 | 申請日： | 2021-03-11 |
| 公開（公告）號： | CN113088499A | 公開（公告）日： | 2021-07-09 |
| 發明（設計）人： | 曾建華;閆云云;胡雪平 | 申請（專利權）人： | 嘉興玖肽生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C07K19/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C12R1/125 |
| 代理公司： | 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 謝洋 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉興市海寧市海寧*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因 重組 蛋白 tat hmsra 純度 純化 方法 | ||
1.一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于包括以下步驟：
S1，獲取表達融合蛋白Trx-Tat-hMsrA的枯草芽孢桿菌菌液；
S2，將所述枯草芽孢桿菌菌液重懸，加入RIPA裂解液，4℃以下溫度下裂解，離心，棄上清后得沉淀；
S3，將所述沉淀用PBS漂洗，而后重懸于RIPA裂解液中，再次在4℃以下溫度下裂解，得裂解混合液；
S4，將所述裂解混合液離心，棄上清，而后向蛋白沉淀中加入腸激酶酶切緩沖液酶切，得酶切后的混合溶液；
S5，將向所述混合溶液中加入復性溶液，復性，得復性混合物；
S6，將所述復性混合物先經納濾除去雜質，而后經離子交換層析柱層析純化，收集目標蛋白Tat-hMsrA，即得。
2.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S2和步驟S3中，4℃以下溫度下裂解采用冰上裂解的方式完成。
3.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S2中，裂解時間控制在15min。
4.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S3中，PBS漂洗3～5次。
5.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S3中，裂解時間控制在15～20min。
6.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S2和S4中，所述離心操作溫度控制在4℃，以12000rpm離心。
7.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S2和S4中，所述離心時間控制在15～20min。
8.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S5中，所述復性所采用的復性溶液為含0.7～1.0mg/mL溶菌酶、1.0～2.0mg/L谷氨酰胺和0.1～0.5mol/L氯化鋅的磷酸緩沖液。
9.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S6中，所述納濾采用水凝膠-納米顆粒濾膜，膜孔徑為0.45μm。
10.根據權利要求1所述的一種基因重組蛋白Tat-hMsrA的高純度純化方法，其特征在于，所述步驟S6中，所述離子交換柱層析采用交聯葡聚糖凝膠柱，并依次采用0、0.1mol/L、0.2mol/L、0.4mol/L、0.6mol/L、0.8mol/L的氯化鈉溶液進行梯度洗脫，收集目標洗脫峰。
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