[發明專利]一種同時檢測血液樣品中多種抗風濕藥物的方法、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202110269540.X
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113049730A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 馮振;景葉松;弭兆元
• 申請（專利權）人: 山東英盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一種同時檢測血液樣品中多種抗風濕藥物的方法，其特征在于，所述抗風濕藥物包括阿司匹林、水楊酸和羥氯喹，所述方法包括：將待測血液樣品進行前處理后進行HPLC-MS/MS檢測。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述前處理過程包括：

向待測血液樣品中加入含內標的0.5～2％(優選為1％)甲酸的甲醇或乙腈溶液，沉淀蛋白后過濾得上清液，以含0.05～0.2％(優選為0.1％)甲酸的10～30％(優選為20％，v/v)甲醇或乙腈水溶液稀釋上清液，混勻后得上機樣本。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述待測血液樣品、含內標的0.5～2％甲酸的甲醇或乙腈溶液和含0.05～0.2％甲酸的10～30％甲醇或乙腈水溶液的體積比為0.5～2:2～3:0.5～2，優選為1:3:1；

所述血液樣品是血漿或血清，優選為血清；

所述沉淀蛋白采用蛋白沉淀板進行。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述檢測方法還包括以標準品制作標準曲線定量，同時采用低、中、高三個水平的質控品進行質控；

優選的，以標準品制作標準曲線定量具體方法包括：以標準溶液濃度為X軸，標準品峰面積為Y軸；進行線性回歸分析得回歸方程；將相應抗風濕藥物峰面積代入標準曲線方程，分別計算待測血液樣品中抗風濕藥物的濃度；

優選的，質控品由活性炭凈化的血液空白樣本添加混合藥物標準物質制得。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC-MS/MS對待測樣品進行檢測具體方法為：

液相色譜條件包括：

采用梯度洗脫，流動相A相：含1～5％乙酸的水溶液，流動相B相：含1～5％乙酸的甲醇；

色譜柱為C18色譜柱；流動相流速為0.3～0.5ml/min(優選為0.4ml/min)；柱溫為30～45℃(優選為40℃)；進樣量1～10μL(優選為5μL)。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，梯度洗脫方式具體流程為：0-0.5min，流動相B 0-5％；0.5-0.7min，流動相B 5-15％；0.7-3.0min，流動相B15-25％；3.0-3.1min，流動相B 25-98％；3.1-4.0min，流動相B98-98％；4.0-4.2min，流動相B98-5％；4.2-5min，流動相B5％-stop。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，質譜條件包括：

離子源：電噴霧(ESI)；掃描方式：多反應監測(MRM)；噴霧電壓正離子/負離子模式4000V，負離子模式2500V，離子傳輸管溫度250℃，蒸發溫度250℃，鞘氣50arb，輔氣310arb。

8.一種同時檢測多種抗風濕藥物的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：阿司匹林、水楊酸和羥氯喹中的任意一種或多種標準品溶液；

含內標的0.5～2％(優選為1％)甲酸的甲醇或乙腈溶液；

含0.05～0.2％(優選為0.1％)甲酸的10～30％(優選為20％，v/v)甲醇或乙腈水溶液；

含1～5％乙酸的水溶液；

含1～5％乙酸的甲醇。

9.如權利要求8所述試劑盒，其特征在于，試劑為色譜純試劑；

所述試劑盒還包括空白血清。

10.權利要求1-7任一項所述同時檢測血液樣品中多種抗風濕藥物的方法和/或權利要求8或9所述試劑盒在抗風濕藥物血藥濃度監測中的應用。