[發明專利]一種用于檢測ClO-

有效

• 申請號: 202110267723.8
• 申請日: 2021-03-12
• 公開（公告）號: CN113135948B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 黃統輝;余永波;安琳;鄭友廣;印曉星
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明涉及一種用于檢測ClO^?/ONOO^?的比率熒光探針及其制備方法和應用，該熒光探針可以單獨檢測ClO^?或ONOO^?；當ClO^?和ONOO^?同時存在時，該熒光探針能夠通過熒光比率變化識別ClO^?和/或ONOO^?，熒光信號間隔較大，不會出現熒光信號相互干擾情況，對ClO^?和ONOO^?都具有高靈敏度，低檢測限(對ClO^?為21nM，ONOO^?為19nM)，良好的選擇性，且探針生物相容性好的優點，可以多通道識別RAW 264.7細胞內的ClO^?和/或ONOO^?。

技術領域

本發明屬于熒光探針檢測領域，具體涉及一種用于檢測ClO^-/ONOO^-的比率熒光探針及其制備方法和應用。

背景技術

研究表明炎癥與多種疾病存在密切關系，例如，癌癥，阿爾茲海默癥，動脈粥樣硬化，肝和肺纖維化等。在炎癥過程中，主要由吞噬細胞例如中性粒細胞，和巨噬細胞將大量的活性氧與活性氮釋放到吞噬細胞膜形成的吞噬小體中，而高活性的活性氧與活性氮可以介導各種生物分子的化學修飾，例如蛋白質，脂質，DNA和RNA，從而破壞入侵的病毒與細菌等的，達到免疫防御功能。然而，在炎癥過程中，活性氧與活性氮過量產生，釋放到吞噬細胞外部，從而攻擊正常組織與細胞，導致一系列疾病，如神經炎癥導致大腦中淀粉樣蛋白團塊的聚集，從而導致阿爾茲海默癥的發展與惡化。

吞噬細胞主要通過兩個途徑免疫防御功能，分別是NADPH氧化酶(Phox)和誘導型一氧化氮合酶(iNOS)途徑。吞噬細胞通過NADPH氧化酶作用下，與細胞膜外兩個氧分子產生超氧陰離子，產生的超氧陰離子通過超氧化物歧化酶(SOD)作用，進一步轉化為過氧化氫。吞噬細胞通過誘導型一氧化氮合酶作用產生一氧化氮。實際上，超氧陰離子，過氧化氫和一氧化氮都不是強氧化劑，在體內也不具有強力殺菌作用。但是，過氧化氫可以通過髓過氧化物酶(MPO)的作用與氯離子生成次氯酸，一氧化氮可以與超氧陰離子通過自由基偶聯產生過氧亞硝酸根(ONOO^-)。次氯酸與過氧亞硝酸根都是具有強氧化性的物質，它們可以通過氧化、硝化、鹵化和脫氨作用直接修飾幾乎所有類型生物分子，從而發揮免疫防御作用，同時與炎癥的相關疾病密切相關。因此，同時對吞噬細胞中產生的ClO^-/ONOO^-進行實時監測對于評估炎癥相關疾病的發生和進展以及開發新的治療方法具有重要意義。目前，已報道的能夠做到同時檢測細胞內的次氯酸根與過氧亞硝酸根的熒光探針并不多，例如，文獻(TingGuo,Lei Cui.A dual-emission and large Stokes shift fluorescence probe forreal-time discrimination of ROS/RNS and imaging in live cells.Chem. Commun.,2013,49,1862-1864)報道一種熒光探針，但是其對過氧亞硝酸鹽的靈敏度較差，沒有過氧亞硝酸根的單獨識別基團，出現熒光檢測信號相互干擾的情況。

文獻(Linfang Wang,Jing Liu,Fluorescence Imaging of Hypochlorous Acidand Peroxynitrite in Vitro and in Vivo with Emission Wavelength Beyond750nm.Chem.Commun.,2020,56,7718-7721) 也報道一種熒光探針，雖然熒光信號可達到近紅外，但同樣只有一個熒光報道基團和靶向基團，選擇性較差，成像熒光信號完全重合，無法區分次氯酸根與過氧亞硝酸根。