[發明專利]一種用于檢測苦瓜果瘤性狀的KASP標記及其應用

有效

• 申請號: 202110265473.4
• 申請日: 2021-03-11
• 公開（公告）號: CN112852994B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 劉小茜;龔浩;鄭曉明;吳海濱;羅劍寧;李俊星;趙鋼軍
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;庹玖玲

1.檢測苦瓜基因組4號染色體上的21911842位置處發生C向T的突變的試劑在苦瓜果瘤性狀檢測和/或輔助育種中的應用，其中，苦瓜基因組4號染色體上的21911842位置為SEQID NO.3所示的正向引物與SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示反向引物的擴增片段中SEQ IDNO.4或SEQ ID NO.5所示反向引物的末位所對應的多態性位點。

2.一種苦瓜果瘤性狀檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括檢測苦瓜基因組4號染色體上的21911842位置處是否發生C向T的突變，其中，苦瓜基因組4號染色體上的21911842位置為SEQ ID NO.3所示的正向引物與SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示反向引物的擴增片段中SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示反向引物的末位所對應的多態性位點。

3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括聚合酶鏈式反應技術、原位雜交技術、酶學突變檢測技術、化學剪切錯配技術、質譜分析技術、基因芯片技術或基因測序技術。

4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為聚合酶鏈式反應技術，所述聚合酶鏈式反應是RT-PCR、免疫PCR、巢式PCR、熒光PCR、膜結合PCR、錨定PCR、固著PCR、原位PCR、不對稱PCR、長距離PCR、降落傘PCR、梯度PCR中的任一種。

5.根據權利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為熒光PCR，所述檢測包括如下步驟：

（1）獲取待測苦瓜基因組DNA；

（2）以核苷酸序列SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.5所示的引物對進行PCR擴增得到產物，其中核苷酸序列SEQ ID NO.4所示的反向引物1包括5’端連接為有HEX基團的熒光標簽序列B，所述熒光標簽序列B如SEQ ID NO.1所示；核苷酸序列SEQ ID NO.5所示的反向引物2包括5’端連接為有FAM基團的熒光標簽序列A，所述熒光標簽序列A如SEQ ID NO.3所示；

（3）將產物在包含3種通道的酶標儀中進行檢測，讀取熒光強度信號值，然后將熒光信號值結合標記信息，進行基因分型，獲得基因型結果；

（4）根據熒光信號值進行分析，其中聚合在X軸且熒光信號呈藍色的樣本為條瘤基因型，A基因型；聚合在Y軸且熒光信號呈綠色的樣本為粒瘤基因型，B基因型；聚合在中間且熒光信號呈紅色的樣本為粒條相間基因型，H基因型。

6.根據權利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為以待測苦瓜基因組DNA為模板，以核苷酸序列如SEQ ID NO.6-SEQ ID NO.7所示引物序列進行PCR擴增后測序檢測。

7.一種苦瓜果瘤性狀檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒包括引物組合，所述引物組合中的正向引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物R1的核苷酸序列如SEQID NO.4所示，反向引物R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

8.權利要求7所述檢測試劑盒在苦瓜輔助育種中的應用。