[發明專利]一種重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110261349.0
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN115073557A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 張強;錢泓;吳有強;賈寶琴;徐玉蘭;聞雪
• 申請（專利權）人: 浙江海隆生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/01
• 分類號: C07K14/01;C12N15/34;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/20;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京乾誠五洲知識產權代理有限責任公司 11042
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白，其特征在于，所述重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白為非洲豬瘟病毒蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如權利要求1所述的重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白，其特征在于，密碼子優化后的所述重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

3.一種制備如權利要求1～2任一所述的重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)重組桿狀病毒獲得：將密碼子優化后的非洲豬瘟病毒pK205R蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的表達基因克隆到轉移載體pBacPAK8中，然后與線性化的DNA質粒共轉染昆蟲細胞，得到含有非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白表達基因的重組桿狀病毒；

2)發酵培養：再將所述重組桿狀病毒進行擴大培養后進行發酵，收集培養液；

3)亞單位蛋白純化：對步驟2)中所述培養液進行純化，純化后得到重組的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位可溶性蛋白。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中，所述昆蟲細胞為sf9細胞和/或HighFive5細胞。

5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中，所述發酵培養的細胞為sf9細胞和/或HighFive5細胞。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中，將所述重組桿狀病毒進行擴大培養的方法包括以下步驟：

2-1)將所述重組桿狀病毒轉染sf9細胞和/或HighFive5細胞，培養72h，得到P1代重組桿狀病毒；

2-2)將所述第一代重組桿狀病毒轉染sf9細胞和/或HighFive5細胞，培養72h，得到P2代重組桿狀病毒；

2-3)重復轉染sf9細胞和/或HighFive5細胞的步驟，獲得Pn代重組桿狀病毒。

7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟2-3)中，所述n為自然數。

8.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，使用鎳柱對所述培養液進行純化。

9.一種如權利要求1-2任一權利要求所述的重組高純度的非洲豬瘟病毒pK205R亞單位蛋白在制備用于預防、診斷和治療非洲豬瘟病毒感染的疫苗中的應用。