[發明專利]一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法

有效

• 申請號: 202110259880.4
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113030088B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 吳迪;黃偉男;陳昆松;石艷娜
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84;G01N33/02
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 張華

本發明涉及一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，解決傳統的采用質構儀或化學提取法評價枇杷木質化存在影響因素考慮不全面，評價標準不夠全面和精確的問題。本方法將枇杷果實沿赤道面剖開并去核，并將赤道面果肉冷凍切片并染色，將木質化細胞分為三類：初級木質化細胞P、中級木質化細胞R和終級木質化細胞U，將赤道面果肉從外到內分為三個環形區域，分別統計三個區域三種木質化細胞的總面積，再統計不同細胞數的成團木質化細胞面積以及維管束面積，對上述各向統計結果進行不同權重的加權統計，用于評價枇杷果實木質化程度。本發明建立了多因素不同權重的細胞快速統計評價方法，評價更加全面準確。

技術領域

本發明屬于農產品檢測方法，涉及一種枇杷采后果實品質評價的研究方法，特別涉及一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法。

背景技術

枇杷原產于我國，是薔薇科、枇杷屬植物。枇杷果肉柔軟多汁，風味鮮美，肉營養價值豐富，風味濃郁，因此廣受消費者喜愛。枇杷成熟于高溫多雨季節，果實的田間熱過大，采后呼吸作用明顯，對果實消耗明顯，極易產生腐敗，加速果實衰老木質化進程。低溫處理廣泛被應用到果實的儲運過程中，以減小果實采后消耗，保持果實品質。但是，枇杷果實屬于冷敏性水果,在低溫環境下容易出現冷害癥狀,其主要表現為果實硬度上升，口感粗糙，果皮難剝，果汁減少,果肉中木質素含量上升，大大削減其果實風味，造成經濟損失。因此，研究枇杷果實木質化過程對枇杷果實的采后果實貯運期間的保鮮,貨架期的延長、商品價值的提升具有現實意義。

目前，評價枇杷木質化程度主要是通過測量果實的硬度或者果肉中的木質素含量。果實的硬度，主要是使用質構儀模擬人的咀嚼行為，使用探頭對果實進行穿刺實驗，在探頭所受的力學曲線中提取特定的峰值，用來評價果實的軟硬程度。硬度的升高是枇杷果實木質化的癥狀的表現之一，果實的硬度還受到多種因素的影響。果實內部細胞的膨壓，細胞壁的不同的成分和結構，細胞壁之間的粘連性都是果實硬度的影響因素。因此，硬度指標評估果實的木質化程度存在不夠全面和精確的問題。果實木質素含量一般通過化學提取法測量，首先基于果肉勻漿，通過一系列分離、過濾、提純步驟獲得果肉勻漿樣本中木質素的總量。與果實的硬度相比，基于化學提取法的木質素含量更能直觀的反映出枇杷果實的木質化狀況。但是化學提取法費時費力，需要幾天的時間才能完全得到分離純化的木質素成分；另一方面，化學提取法的取樣基于果實勻漿，僅僅能夠反應出整體的平均值，而木質素的在果實中的空間分布信息則被隱藏。

發明內容

本發明的目的在于解決傳統的采用質構儀或化學提取法評價枇杷木質化存在影響因素考慮不全面，評價標準不夠全面和精確的問題，提供一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，基于顯微成像對木質化細胞的形態、空間分布進行識別，可以根據不同的木質化情況和位置進行加權統計，對枇杷果實木質化程度進行更科學的評價。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟a、將枇杷果實沿著果實的赤道面剖開，去除一半果實、并去除果核，計算果實整個赤道面的果肉面積S；

步驟b、將赤道面果肉連續冷凍切片，將全部的切片進行間苯三酚方法染色處理；

步驟c、使用光學顯微鏡獲取切片染色結果圖，根據木質化細胞形態的不同，定義木質化程度，將木質化細胞分為三類：初級木質化細胞P、中級木質化細胞R和終級木質化細胞U；

步驟d、將赤道面果肉分為三個環形區域，從外到內分別為靠果皮區域x、中間區域y和靠果核區域z，三個環形區域在每個半徑方向的寬度均相等；

步驟e、分別統計果肉的x、y和z區域中，三種類型的木質化細胞的染色總面積，分別記作：

矩陣中以為例，表示x區域中初級木質化細胞P的面積；