[發明專利]一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法

有效

• 申請號: 202110259880.4
• 申請日: 2021-03-10
• 公開（公告）號: CN113030088B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 吳迪;黃偉男;陳昆松;石艷娜
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84;G01N33/02
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 張華

1.一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟a、將枇杷果實沿著果實的赤道面剖開，去除一半果實、并去除果核，計算果實整個赤道面的果肉面積S；

步驟b、將赤道面果肉連續冷凍切片，將全部的切片進行間苯三酚方法染色處理；

步驟c、使用光學顯微鏡獲取切片染色結果圖，根據木質化細胞形態的不同，定義木質化程度，將木質化細胞分為三類：初級木質化細胞P、中級木質化細胞R和終級木質化細胞U；

步驟d、將赤道面果肉分為三個環形區域，從外到內分別為靠果皮區域x、中間區域y和靠果核區域z，三個環形區域在每個半徑方向的寬度均相等；

步驟e、分別統計果肉的x、y和z區域中，三種類型的木質化細胞的染色總面積，分別記作：

矩陣中以為例，表示x區域中初級木質化細胞P的面積；

步驟f、分別統計果肉的x、y和z區域中，n個木質化細胞成團的染色面積，2≤n≤N，n值不同的成團木質化細胞染色面積分開統計，分別記作：

矩陣中以為例，表示x區域內2個木質化細胞貼靠成團的成團木質化細胞的染色總面積；表示x區域內N個木質化細胞貼靠成團的成團木質化細胞的染色總面積；

步驟g、統計果肉x、y和z三個區域中，維管束染色區域總面積，分別記作：并統計每個區域維管束的條數，分別記作i^x，i^y和i^z；

步驟h、取一批同品種剛成熟采摘未經貯藏的枇杷果實，獲取果肉x、y和z三個區域中，維管束染色面積的矯正系數：將枇杷果實按照步驟a切出果肉赤道面，并按步驟b進行冷凍切片及染色，按照步驟g統計果肉x、y和z三個區域中，維管束染色區域總面積，分別計算果肉x、y和z三個區域中，每條維管束染色區域面積的平均值，作為維管束矯正常數,分別記作：

步驟i、計算每個區域的木質化指數Lig_x、Lig_y和Lig_z和整個果實的木質化指數Lig：

Lig＝a*(2Lig_x+Lig_y+0.5Lig_z)

其中，a為可人為設定的歸一化系數，讓Lig值接近于1，減少小數點位數方便統計；

步驟j、以木質化指數Lig作為枇杷果實木質化評價指數，Lig值越大，枇杷果實木質化程度越嚴重。

2.根據權利要求1所述的一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，其特征在于：步驟c中，對于枇杷果肉細胞：細胞壁增厚但增厚部分未成環形、以及細胞壁增厚至環形但細胞壁厚度占小于細胞半徑的1/4，則記為初級木質化細胞P；細胞壁增厚至環形且細胞壁厚度為細胞半徑的1/4～3/4，則記為中級木質化細胞R；細胞壁增厚至環形且細胞壁厚度超過細胞半徑的3/4，則記為終級木質化細胞U。

3.根據權利要求1所述的一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，其特征在于：步驟b中，連續冷凍切片的每片厚度為40μm。

4.根據權利要求1所述的一種枇杷果實木質化程度的細胞快速統計評價方法，其特征在于：所述枇杷果實為洛陽青枇杷果實，取a＝1000，Lig＝1000*(2Lig_x+Lig_y+0.5Lig_z)，Lig≤0.5為無木質化，0.5＜Lig≤0.75為輕度木質化，0.75＜Lig≤1為中度木質化，1＜Lig為重度木質化。