[發(fā)明專利]一種黃花蒿內(nèi)生真菌來源的環(huán)肽化合物及其作為抗腫瘤藥物的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110257796.9
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113185580A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 申麗;宋輝亮;萬丹;葉桐;李玲玉;徐亞平
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C12P21/04;A61K38/12;A61P35/00;C12R1/645
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本發(fā)明涉及一種黃花蒿內(nèi)生真菌來源的環(huán)肽化合物及其作為抗腫瘤藥物的應用。所述環(huán)肽化合物具有式I所述結(jié)構(gòu)：

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物領(lǐng)域，具體涉及一種黃花蒿內(nèi)生真菌來源的環(huán)肽化合物及其作為抗腫瘤藥物的應用。

背景技術(shù)

癌癥是一個重大公共衛(wèi)生問題，已成為全球第二大死亡原因，僅次于心腦血管疾病。自20世紀40年代，臨床上應用第一個抗腫瘤藥物--氮芥成功治療惡性淋巴瘤以來，化學抗腫瘤藥物的研究已取得巨大的發(fā)展，但對危害人類生命健康最嚴重的、占惡性腫瘤90％以上的實體瘤還缺乏有效治療藥物。耐藥性和惡性腫瘤侵襲/轉(zhuǎn)移是當前化療藥物面臨的重大挑戰(zhàn)，越來越多的研究致力于開發(fā)新穎的化療藥物。盡管現(xiàn)代組合化學與高通量藥物篩選技術(shù)交叉結(jié)合加快了抗腫瘤新藥的研制，但從天然產(chǎn)物中尋找抗腫瘤活性先導化合物仍然是發(fā)現(xiàn)新藥的主要途徑。

與非選擇性地同時抑制正常和腫瘤組織細胞生長的傳統(tǒng)小分子化療藥物相比，天然肽類化合物具有無可比擬的性質(zhì)：其通常含有5～50個氨基酸殘基，易于化學合成和修飾；一些選擇性活性肽常表現(xiàn)出最小的脫靶效應；天然活性肽常見多靶點作用機制，能抵抗某些方式的耐藥性。天然肽類化合物已成為化療藥物的新興來源，在臨床中表現(xiàn)出抗耐藥和廣譜抗腫瘤活性的優(yōu)勢。一些活性肽化合物及其衍生物因其顯著的抗腫瘤作用進入臨床試驗，而Polatuzumab、Plitidepsin等的成功上市預示著將有更多活性肽化合物成為有效化療藥物或藥物先導物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種式I結(jié)構(gòu)的環(huán)肽化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于式I結(jié)構(gòu)如下：

本發(fā)明的另一實施方案提供一種制備上述式I化合物的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將真菌Myrothecium roridum IFB-E091接入PD培養(yǎng)基中，于28℃、140rpm搖床培養(yǎng)5-7天，得種子液；

(2)將步驟(1)培養(yǎng)的真菌Myrothecium roridum IFB-E091進行發(fā)酵培養(yǎng)；將步驟(1)得到的種子液接種于固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28-30℃靜置培養(yǎng)28-30天，得固體發(fā)酵產(chǎn)物；

(3)將步驟(2)得到的固體發(fā)酵產(chǎn)物粉碎陰干后用體積比1:1的氯仿/甲醇混合溶劑浸提2-3次，合并浸提液后減壓濃縮得到發(fā)酵產(chǎn)物浸膏；

(4)步驟(3)得到的發(fā)酵產(chǎn)物浸膏經(jīng)色譜分離即得式I化合物。

步驟(1)所述PD培養(yǎng)基的制備方法為：去皮馬鈴薯200g，切碎成丁，加水煮沸30min，以紗布濾去殘渣，濾液加水補足至1000mL，加20g葡萄糖溶解，分裝，121℃滅菌20min，備用；培養(yǎng)條件為：旋轉(zhuǎn)式搖床，28℃，140rpm，培養(yǎng)5-7天。

步驟(2)所述固體發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為：15mL水、7.5g小米、7.5g麩皮、0.5g酵母膏、0.1g酒石酸鈉、0.1g谷氨酸鈉、0.01g綠礬和0.1mL玉米油。

步驟(4)中所述色譜分離為本領(lǐng)域常規(guī)的色譜分離方法，優(yōu)選正相硅膠柱層析、反相硅膠柱層析、凝膠柱層析、HPLC制備中的一種或幾種組合。此處所述一種或幾種組合，包括同一分離手段的重復使用。所述色譜分離進一步優(yōu)選將發(fā)酵產(chǎn)物浸膏先經(jīng)正相硅膠柱層析，用氯仿/甲醇梯度洗脫(v/v 100:0→0:100)，得到8個極性組分Fr.1～Fr.8；其中Fr.5組分再經(jīng)正相硅膠柱層析，用氯仿/甲醇梯度洗脫(v/v 100:0→100:30)得到6個組分Fr.5-1～Fr.5-6；其中Fr.5-3組分經(jīng)HPLC制備即得式I化合物。其中HPLC制備條件為：HITACHIPrimaide高效液相色譜儀，Sinochrom ODS-AP液相色譜柱(4.6×250mm，5μm)，波長254nm，流動相為甲醇:水(v/v)＝85:15,流速為1mL/min。