[發明專利]一種凝血酶磁珠及其制備方法

在審

• 申請號: 202110256703.0
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112997967A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 李昊元;史之峰;毛穎;楊志朋
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京八月瓜知識產權代理有限公司 11543
• 代理人: 李斌

本發明涉及醫藥技術領域，尤其是涉及一種凝血酶磁珠及其制備方法。凝血酶磁珠為羧基化磁珠與凝血酶反應形成的帶凝血酶的磁珠。凝血酶磁珠的制備方法包括以下步驟:磁珠清洗、磁珠活化、凝血酶與活化磁珠鏈接、封閉磁珠未連接的羧基、清洗與保存。本發明中的凝血酶磁珠，無需進行開顱后顱內局部注射凝血酶、形成血栓等復雜操作，僅需遠端靜脈注射凝血酶磁珠，隨后在需要形成血栓的局部放置磁鐵，從而形成血栓，本發明能夠更加方便、精確和高效地在形成體內血栓，提高了形成血栓位置的準確性，本發明的制備方法方便高效，可以很好地將凝血酶與磁珠相互結合。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，尤其是涉及一種凝血酶磁珠及其制備方法。

背景技術

中國腦卒中發病率為世界第一，根據我國第三次國民死因調查結果表明，腦卒中已經升為中國第一位死因。缺血性腦卒中的主要原因為腦血管栓塞，而急性期最有效的治療方案為溶栓治療。為了了解溶栓藥物對血栓的積極作用和作用機理，需要在動物腦部形成血栓，隨后注入溶栓藥物，觀察溶栓藥物的作用效果。

目前動物腦梗死模型血栓的產生方式主要有：1、將血液放置于體外，形成血栓塊后，注射入體內產生血栓栓塞血管；2、將凝血酶注射到血管局部，形成血栓。但是局部注射常常引起血管滲漏，無法止血，或者凝血酶被血液沖到遠端血管，無法在想要的位置形成栓塞。

發明內容

本發明的目的在于提供一種凝血酶磁珠，在體內栓塞時，無需進行開顱后顱內局部注射凝血酶、形成血栓等復雜操作，能夠更加方便、精確和高效地在形成體內血栓，也能在病理實驗中在想要的位置更快形成血栓，本發明還提供一種其制備方法。

本發明提供一種凝血酶磁珠，所述凝血酶磁珠為羧基化磁珠與凝血酶反應形成的帶凝血酶的磁珠。

羧基化磁珠中的羧基與凝血酶中的氨基發生反應。

本發明所述凝血酶磁珠的的制備方法包括以下步驟：

S1.磁珠活化：將羧基化磁珠通過1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺試劑(NHS)混合激活，后放置于2-(N-嗎啉)乙磺酸(MES)緩沖溶液中，再進行混勻，得到活化后的磁珠；

S2.凝血酶與活化磁珠鏈接：將步驟S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液清洗，隨后加入凝血酶，再進行混勻；

S3.封閉磁珠未連接的羧基：將步驟S2中得到的磁珠放置于磁力架上，移液器棄去上清，同時加入2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液與血清蛋白；

S4.清洗與保存：將步驟S3中得到的磁珠放置于磁力架上，棄去上清，加入磷酸緩沖鹽溶液，得到凝血酶磁珠。

優選地，在磁珠活化之前對羧基化磁珠進行清洗，羧基化磁珠清洗的方式為：取羧基化磁珠，用2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液清洗，再放在磁力架上，將羧基化磁珠聚集于試管底部，再用移液器吸棄上清，去除雜質。

優選地，所述2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液的pH值為6.5，濃度為0.05mol/L，清洗過程中所述2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液與所述羧基化磁珠的體積比為5:1。

優選地，步驟S1中所述羧基化磁珠的粒徑為100-120nm，濃度為5mg/ml。

優選地，步驟S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑與所述N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1:2，可以高效活化羧基。

優選地，步驟S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑與所述羧基化磁珠的質量比為1:9.8-10.2，優選為1:10；步驟S1中所述混勻的溫度為20-25℃，時間為3-5h。