[發(fā)明專利]一種凝血酶磁珠及其制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110256703.0 | 申請日： | 2021-03-09 |
| 公開（公告）號： | CN112997967A | 公開（公告）日： | 2021-06-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李昊元;史之峰;毛穎;楊志朋 | 申請（專利權(quán)）人： | 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院 |
| 主分類號： | A01K67/027 | 分類號： | A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京八月瓜知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11543 | 代理人： | 李斌 |
| 地址： | 200040 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 凝血酶 及其 制備 方法 | ||
1.一種凝血酶磁珠，其特征在于，所述凝血酶磁珠為羧基化磁珠與凝血酶反應(yīng)形成的帶凝血酶的磁珠。
2.一種權(quán)利要求1所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.磁珠活化：將羧基化磁珠通過1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑與N-羥基琥珀酰亞胺試劑混合激活，后放置于2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液中，再進行混勻，得到活化后的磁珠；
S2.凝血酶與活化磁珠鏈接：將步驟S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液清洗，隨后加入凝血酶，再進行混勻；
S3.封閉磁珠未連接的羧基：將步驟S2中得到的磁珠放置于磁力架上，移液器棄去上清，同時加入2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液與血清蛋白；
S4.清洗與保存：將步驟S3中得到的磁珠放置于磁力架上，棄去上清，加入磷酸緩沖鹽溶液，得到凝血酶磁珠。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，在磁珠活化之前對羧基化磁珠進行清洗，羧基化磁珠清洗的方式為：取羧基化磁珠，用2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液清洗，再放在磁力架上，將羧基化磁珠聚集于試管底部，再用移液器吸棄上清。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，所述2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液的pH值為6.5，濃度為0.05mol/L，清洗過程中所述2-(N-嗎啉)乙磺酸緩沖溶液與所述羧基化磁珠的體積比為5:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述羧基化磁珠的粒徑為100-120nm，濃度為5mg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑與所述N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1:2。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽試劑與所述羧基化磁珠的質(zhì)量比為1:9.8-10.2；步驟S1中所述混勻的溫度為20-25℃，時間為3-5h。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S2中所述凝血酶與步驟S1中羧基化磁珠的投料比為50-100:200，所述凝血酶以ug計，所述羧基化磁珠以uL計；步驟S2中所述混勻的溫度為20-25℃，時間為6-8h。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述血清蛋白與步驟S2中凝血酶的質(zhì)量比為1000:50-100。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凝血酶磁珠的制備方法，其特征在于，步驟S4中得到凝血酶磁珠在4±0.5℃下放置保存。
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