[發明專利]革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物及方法

有效

• 申請號: 202110254677.8
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113151257B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 孟凡明;劉子超;吳翔;蔣立平;楊帆
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12N15/12
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

本發明公開了一種革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物及其擴增方法，通過SEQ ID NO.1?20所示的10對特異性引物對革利虱蠅基因組進行PCR擴增，擴增產物電泳后進行測序及序列拼接，獲得虱蠅線粒體全基因組序列，可為川藏地區野生動物攜帶病蟲害的防治，以及野生動物健康狀況監測工作提供物質基礎。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別涉及一種虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物及其擴增方法。

背景技術

革利虱蠅Lipoptena grahami,屬于雙翅目(Diptera)，虱蠅科(Hippoboscidae),利虱蠅屬Lipoptena。利虱蠅屬為廣泛分布的專性吸血性昆蟲，成蟲寄生在鹿、羚牛、羊、馬等大型有蹄類動物體表，吸食宿主血液，其體內由于攜帶有傳染性病菌，可傳播蜱蠅錐蟲、伯氏疏螺旋體、藍舌病病毒、巴爾通體等多種病菌，導致宿主嚴重感染甚至死亡。寄生在綿羊體表的虱蠅還可引起宿主體重下降、羊毛產量以及皮毛品質下降，給畜牧業帶來嚴重經濟損失。已有研究報道該物種在缺少天然宿主情況下，亦可吸食人類血液，為潛在的衛生防疫害蟲。

革利虱蠅于1942年首次發現于中國四川地區，此后再無相關記錄和報道，且一直未發現和記錄其宿主為何種動物。本發明專利中涉及的革利虱蠅采集自西藏地區，并明確其宿主為林麝，在宿主體表營吸血生活，因此該物種對于川藏地區野生動物攜帶病蟲害的防治，以及野生動物健康狀況監測工作具有一定價值。國內外關于虱蠅的研究十分有限，僅有零星常見種類報道，而采用分子生物學技術對虱蠅的研究不多，目前該科類群中僅有一個種類有完整的線粒體基因組公布，關于該類群線粒體基因組全序列獲得方法尚未見報道。鑒于目前虱蠅遺傳學尤其是線粒體基因組方面的信息量十分有限,開展其線粒體基因組全序列的研究顯得十分必要。

目前擴增線粒體基因組全序列的方法大多采用引物步移法，通過對公共數據庫中近緣物種線粒體基因組中保守區設計引物，對目標區域擴增序列并測序,對測序得到的序列再繼續設計引物進行擴增測序，重復這一步驟直到測序得到的全部序列經拼接后獲得完整線粒體基因組序列位置。以往的引物擴增反應后產物長度較短(400-500bp)，按照線粒體基因組大小15000bp計算，需要設計30對以上的引物來完成全部片段的擴增和有效拼接，費時費力，且反復擴增測序導致錯誤率升高，影響測序后的拼接結果和注釋準確性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物，通過10對經過反復篩選的特異性引物對革利虱蠅基因組進行PCR擴增獲得革利虱蠅線粒體全基因組序列，可為川藏地區野生動物攜帶病蟲害的防治，以及野生動物健康狀況監測工作提供研究基礎。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物，包括10對引物對，具體序列信息如下所示：

(1)第1對上游引物為：SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列(GTATCAAAAACTTTTGTGCATCA)，下游引物為：SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列(TAGTCAATTTCCAAATCCACCAAT)；

(2)第2對上游引物為：SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列(CTACTCCTTTAGAATTGCAGTCT)，下游引物為：SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列(CTATAAAGTGATTTAAGAGACCA)；

(3)第3對上游引物為：SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列(CAATGTTCAGAAATTTGTGG)，下游引物為：SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列(GCTCATGTAATAGTAATTCC)；

(4)第4對上游引物為：SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列(TTACAATTTATCAATGATGACG)，下游引物為：SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列(TGAAGATATTAAGGTGATTGAT)；