[發明專利]革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物及方法

有效

• 申請號: 202110254677.8
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113151257B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 孟凡明;劉子超;吳翔;蔣立平;楊帆
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12N15/12
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

1.一種革利虱蠅線粒體全基因組序列的擴增引物，其特征在于，包括10 對引物對，具體序列信息如下所示：

（1）第1 對上游引物為：SEQ ID NO.1 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

（2）第2 對上游引物為：SEQ ID NO.3 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

（3）第3 對上游引物為：SEQ ID NO.5 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

（4）第4 對上游引物為：SEQ ID NO.7 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列；

（5）第5 對上游引物為：SEQ ID NO.9 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列；

（6）第6 對上游引物為：SEQ ID NO.11 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列；

（7）第7 對上游引物為：SEQ ID NO.13 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列；

（8）第8 對上游引物為：SEQ ID NO.15 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列；

（9）第9 對上游引物為：SEQ ID NO.17 所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列；

（10）第10對上游引物為：SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列，下游引物為：SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列。

2.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒用于擴增虱蠅線粒體全基因組序列，所述試劑盒包括權利要求1所述的擴增引物。

3. 一種虱蠅線粒體全基因組序列的擴增方法，其特征在于：以提取的虱蠅基因組DNA為模板，用權利要求1所述的10 對擴增引物進行PCR 擴增，PCR 產物經1.0% 瓊脂糖電泳檢測后送測序。

4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應體系為50μL，其中：60 ngDNA模板、0.2-1.0μM 引物、8μL 2.5mM dNTP、5μL 10×PCR Buffer、2.0mM MgCl₂、0 .5μLTaq酶，余量為無核酸酶水。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增條件為：94℃預變性2min，然后94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，共35個循環，最后72℃延伸10min。