[發(fā)明專利]一種質(zhì)控菌株定量小球的制備及使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110253964.7
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN112980692B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設計）人: 蔡向榮;許英俊;李杜娟
• 申請（專利權）人: 青島高科技工業(yè)園海博生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C12Q1/06;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 北京一格知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 李魏英

1.一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)質(zhì)控菌株的單菌落挑至液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對數(shù)生長期，得菌液；

(2)取定量菌液至凍干菌種保護劑中，并用保護劑稀釋得保護劑菌液；

(3)取定量保護劑菌液，用液氮冷凍成球后進行預凍；

(4)將步驟(3)得到預凍小球進行真空冷凍干燥，得干燥小球；

(5)分裝至西林瓶；

步驟(2)中，每100ml所述凍干菌種保護劑包括以下組分及其質(zhì)量配比：蛋白質(zhì)10％，水溶性糖5％，凍干塑形劑10％，余量為水；所述凍干菌種保護劑為蛋白質(zhì)、水溶性糖與凍干塑形劑全部溶解后，經(jīng)115℃高壓滅菌20分鐘，冷卻所得；

步驟(3)中，液氮冷凍過程中使用液氮冷凍小球裝置，所述液氮冷凍小球裝置包括保溫容器，點樣針和冷凍多孔板，所述保溫容器內(nèi)容納液氮，所述冷凍多孔板置于所述保溫容器內(nèi)，所述冷凍多孔板設有數(shù)個間隔板，所述間隔板縱橫交叉形成數(shù)個冷凍空間，每個冷凍空間底部設冷凍孔，所述點樣針置于所述保溫容器上方，所述點樣針底端距離液氮液面5-8cm，向所述冷凍間隔空間滴加菌液，待所有所述冷凍空間均滴入一滴菌液，菌液定型成小球之后，再重復向所述冷凍空間滴加菌液的操作。

2.根據(jù)權利要求1所述一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，所述蛋白質(zhì)為人血清白蛋白、小牛血清、脫脂奶粉中的至少一種；所述水溶性糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖、乳糖、半乳糖中的至少一種；所述凍干塑形劑為聚乙二醇4000、聚乙二醇8000、聚乙二醇20000、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，吸取菌液50ul。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，菌液稀釋100倍。

5.根據(jù)權利要求4所述的一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，預凍條件為-35℃，2h。

6.根據(jù)權利要求5所述的一種質(zhì)控菌株定量小球的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中，真空冷凍干燥參數(shù)：-35℃～-30℃，干燥6-7h；10℃-25℃二次干燥2-3h。