[發明專利]人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法

在審

• 申請號: 202110252951.8
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113372429A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 姚愛紅;楊浩;萬靖;劉承;張鑫
• 申請（專利權）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 成都七星天知識產權代理有限公司 51253
• 代理人: 袁春曉

本發明涉及多肽合成技術領域，尤其涉及人血清淀粉樣蛋白Aβ1?42的制備方法。本發明提供的人血清淀粉樣蛋白Aβ1?42的制備方法，以Boc?Ser(Fmoc?Gly)?OH為原料之一，按照人血清淀粉樣蛋白Aβ1?42的氨基酸序列制備26?氧酰異Aβ1?42，經酰基遷移得到人血清淀粉樣蛋白Aβ1?42；該方法以側鏈活性基團全保護的氨基酸為原料，降低了合成過程中發生副反應的幾率；并且各步驟中，控制合成參數，從而提高了產物的收率，減少了副反應的發生。

技術領域

本發明涉及多肽合成技術領域，尤其涉及人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法。

背景技術

“阿爾茨海默癥”(Alzheimer disease)，簡稱AD，是與老齡化有關的、以大腦神經細胞廣泛死亡為特點的疾病，其結果是大腦神經細胞逐漸喪失，最終造成記憶力、判斷決策力、方位感、注意力和語言能力的損傷。近年來阿茨海默癥發病率呈明顯上升趨勢，我國的發病率為0.71％，約有1000萬阿爾茨海默癥患者。預計到2050年，我國阿爾茨海默癥患者人數將達2700萬。由于阿爾茨海默癥是與年齡密切相關的疾病，在65歲的人群中約有10％的人患病，而在85歲人群中則約有50％的人患病。

阿爾茨海默癥的病理特征主要包括大腦皮質和海馬區域的細胞外出現以β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid,Aβ)為核心的老年斑、細胞內神經原纖維纏結等病變。Aβ是由淀粉樣前體蛋白經β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而產生的含有39～43個基酸的多肽，Aβ的大量沉積，是導致AD病人腦內老年斑周邊神經元變性和死亡的主要原因。Aβ在腦內有多種存在形式，如：低分子量Aβ單體、Aβ寡聚體、不溶性Aβ纖維體等。Aβ單體是可溶性的低分子物質，但是當胞內環境改變時會誘發Aβ單體快速聚集，形成二聚體、三聚體或可溶性的Aβ寡聚體，Aβ寡聚體的穩定性較差，易向Aβ纖維體轉化。Aβ的種類分為Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42和Aβ1-43，其中Aβ1-42的毒性最大，具有強水性、易聚集和較強的神經毒性作用，是AD的核心致病物質。因此，研究Aβ1-42是當前的熱點。

Aβ1-42的氨基酸序列自N端至C端為：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA。

國內外合成Aβ1-42的寡聚體均不穩定，淀粉樣肽在體外容易隨機形成各種高分子量或低分子量的混合產物，這種組分不均一的混合物直接影響到實驗結果的準確性和可靠性。近年來，許多研究者用多種方法制備Aβ1-42寡聚體，但收率都較低、中間產物不穩定、成分復雜。Aβ1-42由于其高度疏水性以及容易形成聚集，常規固相合成的方式很難制備出Aβ1-42。進一步開發固相合成多肽Aβ1-42的方法，可為AD科研實驗打下良好的基礎，也為AD的發病機制、病理過程、尋找和篩選有效藥物提供有效依據。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法，該方法以側鏈活性基團全保護的氨基酸為原料，降低了合成過程中發生副反應的幾率；并且各步驟中，控制合成參數，選擇合理的反應試劑，從而提高了產物的收率，減少了副反應的發生。

本發明提供的人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法，包括：

以Boc-Ser(Fmoc-Gly)-OH為原料之一，按照人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的氨基酸序列制備26-氧酰異Aβ1-42，經酰基遷移得到人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42；

偶聯1～25位中任意氨基酸或多肽后，脫除Fmoc的步驟中采用8vol％～12vol％哌啶/DMF溶液。