[發明專利]人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法在審
| 申請號： | 202110252951.8 | 申請日： | 2021-03-09 |
| 公開（公告）號： | CN113372429A | 公開（公告）日： | 2021-09-10 |
| 發明（設計）人： | 姚愛紅;楊浩;萬靖;劉承;張鑫 | 申請（專利權）人： | 江蘇金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/47 | 分類號： | C07K14/47;C07K1/06;C07K1/04 |
| 代理公司： | 成都七星天知識產權代理有限公司 51253 | 代理人： | 袁春曉 |
| 地址： | 212000 江蘇省鎮江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 血清 淀粉 蛋白 42 制備 方法 | ||
1.人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的制備方法，其特征在于，包括：
以Boc-Ser(Fmoc-Gly)-OH為原料之一，按照人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42的氨基酸序列制備26-氧酰異Aβ1-42，經酰基遷移得到人血清淀粉樣蛋白Aβ1-42；
偶聯1～25位中任意氨基酸或多肽后，脫除Fmoc的步驟中采用8vol％～12vol％哌啶/DMF溶液。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，偶聯第41位氨基酸的步驟中，偶聯劑為HATU/DIEA，或Pybop/DIEA。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，在偶聯32位和31位氨基酸或Boc-Ser(Fmoc-Gly)-OH的偶聯步驟中，依次以DIC/HOBt和HATU/HOBT/DIEA為偶聯劑，進行兩次偶聯反應。
4.根據權利要求2或3所述的制備方法，其特征在于，除第41位、32位、31位、25-26位氨基酸外，其他偶聯步驟的偶聯劑選自DIC/HOBt、HATU/HOBT/DIEA、HBTU/HOBT/DIEA或PyBOP/HOBT/DIEA。
5.根據權利要求1～4任一項所述的制備方法，其特征在于，偶聯第32位和第31位氨基酸的步驟中，氨基酸的投料量為5eq。
6.根據權利要求1～5任一項所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯的溶劑選自DMF、CH2Cl2、NMP。
7.根據權利要求1～5任一項所述的制備方法，其特征在于，偶聯1～25位中任意氨基酸或多肽后，所述脫除Fmoc的條件為20～25℃，5min，脫除2次；
偶聯27～42位中任意氨基酸或多肽后，脫除Fmoc的試劑為20vol％哌啶/DMF溶液，條件為20～25℃，5～30min。
8.根據權利要求1～6任一項所述的制備方法，其特征在于，所述合成為固相合成，其載體為CTC樹脂或Wang樹脂。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述固相合成后，切割樹脂的裂解劑為苯甲硫醚、苯酚、EDT、碘化銨和水中的至少一種與TFA的混合液。
10.根據權利要求1～9任一項所述的制備方法，其特征在于，所述酰基遷移為將26-氧酰異Aβ1-42溶解于乙腈水溶液中，以氨水調節pH值為7.4，25℃反應4小時，制得Aβ1-42。
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