[發(fā)明專利]一種乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110252787.0
• 申請日: 2021-03-09
• 公開（公告）號: CN113075405A
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王勝嵐;馬玉蘭;黃永宏;李梅;許玉燕
• 申請（專利權(quán)）人: 中山生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/543
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 尹凡華

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和免疫學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒及其制備方法。所述檢測試劑盒包括：包被有HBsAg單克隆抗體的包被板、底物液、酶標HBsAg多克隆抗體溶液、陰性對照、陽性對照、濃縮洗滌液和終止液；所述包被板中采用包被緩沖液對HBsAg單克隆抗體進行稀釋，所述HBsAg單克隆抗體與包被緩沖液的體積比為1：(1500?2500)；所述酶標HBsAg多克隆抗體溶液中采用酶標稀釋液對酶標HBsAg多克隆抗體進行稀釋，所述酶標HBsAg多克隆抗體與酶標稀釋液的體積比為1：(800?1200)。所述檢測試劑盒具有靈敏性高，特異性好和重復(fù)性強的突出優(yōu)勢，可滿足定性檢測人血清或血漿中乙肝病毒表面抗原的實際需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和免疫學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

乙肝病毒(乙型肝炎病毒，HBV)是致人乙型肝炎的病原體，是目前世界上傳染最廣泛的致命病毒之一，乙型肝炎病毒的感染已全世界最重要的公共衛(wèi)生問題之一。由于目前還沒有治療乙型肝炎的有效手段，因此疫苗接種、早期檢測診斷是預(yù)防乙型肝炎的重點。

乙型肝炎的病原學(xué)診斷，最常用的是乙肝病毒血清標志物(HBVM)的檢測。HBVM主要包括七種血清標志物：乙肝表面抗原、乙肝表面抗體、乙肝核心抗體、乙肝e抗原、乙肝e抗體、HBV-DNA及DNA多聚酶。通過檢測HBVM可以間接的多角度了解患者HBV感染、復(fù)制以及病情恢復(fù)情況。在現(xiàn)有的檢測HBVM的眾多方法中，ELISA(酶聯(lián)免疫法)因其原理簡單、使用方便和價格便宜的特性，已成為國內(nèi)外應(yīng)用的較為廣泛的一種方法。

乙肝表面抗原(HBsAg)是乙肝病毒的外殼蛋白，本身不具有傳染性，但它的出現(xiàn)常伴隨乙肝病毒的存在，一般是在感染乙肝病毒1-2周之后出現(xiàn)，意味著乙肝病毒的感染。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。

然而，由于現(xiàn)有市面上的乙肝表面抗原相關(guān)檢測產(chǎn)品的檢測效果仍有所不足，易出現(xiàn)假陽性或假陰性的現(xiàn)象。因此，希望提出一種靈敏度更高，特異性更好且重復(fù)性好的乙肝病毒表面抗原檢測產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒及其制備方法，所述檢測試劑盒具有靈敏性高，特異性好和重復(fù)性強的突出優(yōu)勢，可滿足定性檢測人血清或血漿中乙肝病毒表面抗原的實際需求。

本發(fā)明提供了一種乙肝病毒表面抗原檢測試劑盒，包括：包被有HBsAg單克隆抗體的包被板、底物液、酶標HBsAg多克隆抗體溶液、陰性對照、陽性對照、濃縮洗滌液和終止液；

所述包被板中采用包被緩沖液對HBsAg單克隆抗體進行稀釋，所述HBsAg單克隆抗體與包被緩沖液的體積比為1：(1500-2500)；

所述酶標HBsAg多克隆抗體溶液中采用酶標稀釋液對酶標HBsAg多克隆抗體進行稀釋，所述酶標HBsAg多克隆抗體與酶標稀釋液的體積比為1：(800-1200)。

本發(fā)明所述檢測試劑盒采用雙抗體夾心法原理(ELISA)檢測人血清或血漿中的乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。首先將純化的HBSAg單克隆抗體包被到微孔板，并保持其免疫活性，制得包被板。在測定時，HBSAg單克隆抗體可與樣本中的HBsAg特異性結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標記的HBsAg多克隆抗體，酶標記的HBsAg多克隆抗體與HBsAg特異性結(jié)合，最終形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，用洗滌的方法使形成的復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的辣根過氧化物酶的量與樣本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物(底物液)后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與樣本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，最后根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來判斷受檢樣本中是否含有HBSAg。