[發明專利]一種抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法

在審

• 申請號: 202110252273.5
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112997883A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 金宇浩;李飛飛
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京艾皮專利代理有限公司 11777
• 代理人: 李德勝

1.一種抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，將秈稻的愈傷組織放置于抗草甘膦培養基中進行培育。

2.根據權利要求1所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述抗草甘膦培養基的組分包括以下重量份的組分：

抗草甘膦黑麥草愈傷組織10-15重量份、培養基懸浮液30-50重量份、中草藥制劑5-10重量份、改性蛋白質2-4重量份、營養劑0.5-1重量份、抗菌劑0.5-1重量份、PH調節劑0.5-1重量份。

3.根據權利要求2所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述抗草甘膦培養基的組分包括以下重量份的組分：

抗草甘膦黑麥草愈傷組織13重量份、培養基懸浮液45重量份、中草藥制劑8重量份、改性蛋白質3重量份、營養劑0.8重量份、抗菌劑0.8重量份、PH調節劑0.8重量份。

4.根據權利要求2所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述抗草甘膦培養基的制備方法包括以下步驟：

S1：制備抗草甘膦愈傷組織:取黑麥草的愈傷組織，將黑麥草的愈傷組織放置于含有草甘膦的培養基中培育3-5d，加入PH調節劑控制PH值為6-7，完成后得到抗草甘膦黑麥草愈傷組織；

S2：制備培養基懸浮液：取200μL新鮮的懸浮液，3000rpm離心20s，60°C水浴熱擊5min，然后轉入0°C冰浴2min后，得到培養基懸浮液，按重量份將培養基懸浮液加入培養基中；

S3：制備中草藥制劑，按重量份將中草藥制劑加入培養基懸浮液中，混合均勻，并用移液槍吸去表面多余的中草藥制劑，常溫下靜置30-90min，完成后備用；

S4；制備改性蛋白質，將改性蛋白質按重量份加入培養基懸浮液中；

S5：按重量份依次加入營養劑、抗菌劑和PH調節劑，與改性蛋白質一起混合均勻即可；

S6：將抗草甘膦黑麥草愈傷組織加入培養基中即可完成。

5.根據權利要求4所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述PH調節劑為檸檬酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、磷酸中的一種或幾種。

6.根據權利要求4所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述中草藥制劑包括以下重量份的組分：

當歸7重量份、枸杞5重量份、田七3重量份、甘草5重量份、薰衣草2重量份、茉莉花0.5重量份、寧香草0.8重量份、何首烏1重量份、黨參1重量份。

7.根據權利要求4所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述中草藥制劑的制備方法包括以下步驟：

S1:按重量份取原料，原料包括：當歸、枸杞、田七、甘草、薰衣草、茉莉花.、寧香草、何首烏、黨參，將原料清洗干凈，晾干備用；

S2：將當歸、枸杞、田七放入反應甕，加水升溫，水加至剛末過藥材，升溫至150℃，至藥液濃縮至20-30重量份為止，靜置冷卻，得到中藥初液；

S3：將何首烏、黨參、甘草放入反應甕內，加水升溫，水加至剛末過藥材，升溫至110℃，至藥液濃縮至50-60重量份為止，開始降溫至溫度為60-80℃，加入薰衣草、茉莉花、寧香草后繼續熬制5-6h，室溫下冷卻，過濾掉藥渣，得到混合藥液；

S4：將中藥初液與混合藥液混合，攪拌均勻即可制得中草藥制劑。

8.根據權利要求4所述的抗草甘膦轉基因秈稻的制備方法，其特征在于，所述改性蛋白質的制備方法包括以下步驟：

S1：取新鮮豆漿倒入鍋中加熱煮沸，將煮沸的豆漿倒入不銹鋼托盤中，將托盤放入冰箱，靜置；

S2：待豆漿表面自然凝結成一層蛋白質薄膜，用鑷子鑷取得到蛋白質薄膜；

S3：將蛋白質薄膜和質量分數為10%的氫氧化鈉溶液混合后裝入研磨罐中，研磨20～30min；

S4：研磨結束后用濃度為1mol/L鹽酸調節pH至中性，得到蛋白質分散液；

S5：將蛋白質分散液和硝酸銅以及硫酸鐵混合后放入反應釜中，在常溫下攪拌反應，得到改性蛋白質。