[發明專利]一種木霉屬真菌中天然綠色色素的提取方法

有效

• 申請號: 202110251886.7
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112778792B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 陸瑞利;胡豐林;尉杰;趙鋮
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C09B61/00
• 分類號: C09B61/00;C09B67/54;C12N1/14;C12N3/00;C12R1/885
• 代理公司: 合肥金安專利事務所(普通合伙企業) 34114
• 代理人: 金惠貞

本發明涉及一種木霉屬真菌中天然綠色色素的提取方法，屬于生物制品的提取制備技術領域。提取操作步驟如下：1培養木霉屬真菌的菌種；2擴大培養得到大米培養物；3將大米培養物干燥，收取孢子；4孢子除雜得到除雜孢子；5制備色素粗提液；6濃縮干燥得到色素粗提物；7精制色素沉淀物；8將精制色素沉淀物干燥，得到墨綠色粉末狀的天然綠色色素。本發明的綠色天然色素，在室內散失光下其穩定性是葉綠素的465倍；在光照時不易降解，在室溫下放置一年，色素保存率仍有77%。研究發現其不溶于常見溶劑如水、乙醇、汽油、食用油及洗潔劑等常見試劑，因此著色后不易被水、有機溶劑或洗滌劑洗掉，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物制品的提取制備技術領域，具體涉及從木霉中提取綠色色素的工藝方法。

背景技術

木霉的孢子呈現綠色但其綠色色素至今未得到分離鑒定，其主要原因是目前常用的天然色素提取方法均無法從木霉中提取出綠色色素。只有將該綠色色素提取出來，才可為其分子結構與代謝通路的鑒定，及商品化應用奠定基礎。

目前合成色素對消費者和環境的有害影響受到普遍的關注，尋求天然色素作為合成色素的代替品正成為研究熱點。世界范圍內對天然著色劑的需求在食品、化妝品和紡織行業迅速增長。

目前，通過植物和微生物生產的色素和著色劑是現代色素工業開發的主要來源。天然色素中，黃色和紅色色素較多，但綠色色素除葉綠素外，其它種類較少。并且，天然葉綠素脫離植物細胞后易受環境中的光照、溫度、氧化劑等因素的影響而被破壞，性質不穩定，因此亟需一種環境耐受更佳的天然綠色色素作為葉綠素的替代品。

發明內容

本發明的目的是提供一種木霉屬真菌中天然綠色色素的提取方法。

一種木霉屬真菌中天然綠色色素的提取操作步驟如下：

（1）培養菌種

將木霉屬（Trichoderma）真菌接種于PDA培養基培，20～35℃條件下培養2～6天，得到菌種；

（2）擴大培養

將所述菌種接種于PDB液體培養基中，在轉速150～250轉/分鐘、21～35℃條件下搖瓶培養2～6天；按1～10%體積重量比（V/W）接種到大米培養基中，培養7～15天，得到大米培養物；

（3）孢子收集

將大米培養物在-50～130℃干燥，然后使用收孢機或旋風分離器收取孢子；

（4）孢子除雜

按重量體積比1g ：0.5～5 mL，在孢子中加入除雜劑1號，在溫度10～50℃、第一次回流提取30～600分鐘，提取液回收用于下一批樣品處理；固體部分按重量體積比1g ：0.5～5 mL，加入除雜劑2號，第二次回流提取30～600分鐘，提取液回收用于下一批樣品處理；固體部分再按重量體積比1g ：0.5～5 mL，加入除雜劑3號，攪拌均勻，在溫度20～90℃、超聲提取20～400分鐘，過濾或離心，棄去濾液或離心上清，得到除雜孢子；

（5）制備色素粗提液

在除雜孢子中按重量體積比1g ：0.5～5 mL加入提取劑，攪拌或者室溫下40KHz超聲提取1～10小時，過濾或離心，濾液或離心上清即為色素粗提液；

（6）濃縮干燥

將色素粗提液減壓濃縮，減壓干燥，即得到色素粗提物；

（7）精制色素沉淀物