[發明專利]一種評估NK細胞抗巨細胞病毒作用的方法

有效

• 申請號: 202110251612.8
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN113109570B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 黃曉軍;趙翔宇;商倩楠;余星星
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 北京潤澤恒知識產權代理有限公司 11319
• 代理人: 茍冬梅

本發明提供了一種評估NK細胞抗巨細胞病毒作用的系統，該系統包括：第一評估子系統，用于評估NK細胞的抗巨細胞病毒的功能；第二評估子系統，用于評估NK細胞抑制巨細胞病毒擴增的功能；第三評估子系統，用于評估被NK細胞作用后的巨細胞病毒的再感染力；第四評估子系統，用于評估NK細胞對巨細胞病毒的清除功能。通過本發明提供的系統，對自然殺傷細胞(NK細胞)的抗巨細胞病毒作用進行了科學、規范地評估，并為自然殺傷細胞在抗巨細胞病毒中的應用，提供了科學、系統的參考依據，因而，本發明提供的系統具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于醫學和生物學檢測領域，特別是涉及一種評估NK細胞抗巨細胞病毒作用的方法。

背景技術

異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)是根治惡性血液疾病有效乃至唯一的方式。感染是allo-HSCT后最常見的并發癥，占移植相關死亡的近50％。Allo-HSCT后早期免疫細胞數量及功能未重建至正常水平，極易發生感染。其中巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染成為Allo-HSCT后主要的死亡原因。移植后CMV感染發生率高達30-80％，且可引起GVHD和細菌或真菌感染，增加移植相關死亡風險，導致移植結果差。抗病毒藥物的預防和治療效果有限，且長時間應用抗病毒藥物會導致病毒耐藥株的出現，而且可引起明顯的骨髓抑制和腎功能損害等一系列藥物副作用。因此CMV感染的預防和治療仍是目前亟待解決的重大難題。

自然殺傷細胞(NK細胞)作為一類天然免疫細胞，對刺激信號的快速效應能力能夠很好地保護機體，成為適應性免疫啟動之前的一道強有力的防線，NK細胞的抗CMV作用已有部分研究。對于NK細胞缺陷的小鼠，感染MCMV后較正常小鼠病毒復制加快，誘導肝炎加重，生存時間明顯縮短。Scalzo等發現，NK能夠識別MCMV感染的細胞以發揮抗病毒作用。Lanier團隊發現Ly49H+NK“記憶樣”細胞亞群遇到CMV時快速擴增，CMV控制后該亞群可在組織中潴留多個月，具有快速活化和分泌因子的潛能，在CMV二次感染時具有更強的保護性。然而，CMV具有嚴格的種屬特異性。人NK細胞控制HCMV感染的作用也有部分描述。純化的NK細胞體外可直接抑制CMV的復制。Biron等報道了NK細胞缺陷的病人易反復發生嚴重的皰疹病毒感染的病例。而發生CMV感染的T細胞缺陷的病人，血清中HCMV病毒載量與NK細胞數量和細胞因子水平成反比，提示NK細胞的功能與CMV的清除具有密切關系，且可以在不存在T細胞的情況下控制CMV的感染。另有研究表明HCMV血清陽性患者相比陰性患者，NK細胞表面有更強的NKG2C受體表達。對于這群NKG2C+NK亞群更深入的研究發現，HCMV急性感染期間NKG2C+NK會發生大量擴增，而HCMV血清陽性健康人NKG2C+NK可以較高比例持續多年，并在HCMV重激活時發揮作用。總結來看，現有研究多從臨床現象為出發點，較零散的評估NK細胞的殺傷性。對于NK細胞抗HCMV的作用，缺乏較系統的評估。

NK細胞的過繼性回輸在腫瘤的治療手段中極具前景。但是由于人外周血中NK細胞數量有限，當前多采用體外誘導和擴增技術獲取大量的NK細胞用于腫瘤免疫。然而，體外擴增的NK細胞是否具有抗CMV作用，卻是未知的。

因此，本領域中，關于NK細胞是否具有抗CMV作用，缺乏系統的評估方式；更甚者，關于體外擴增的NK細胞是否具有抗CMV作用，也是未知的。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種評估NK細胞抗巨細胞病毒作用的方法，該方法是一種結合體外與體內的綜合評估方法，從而該評估系統具有科學性、完整性、規范性以及有效性等特點，為生物醫學檢測領域提供了較優的參考價值。本發明的內容具體如下：

本發明提供了一種評估NK細胞具有抗巨細胞病毒作用的系統，所述系統包括：

第一評估子系統，用于評估NK細胞的抗巨細胞病毒的功能；

第二評估子系統，用于評估NK細胞抑制巨細胞病毒擴增的功能；

第三評估子系統，用于評估被NK細胞作用后的巨細胞病毒的再感染力；