[發明專利]生成雙鏈銜接物的方法

在審

• 申請號: 202110251569.5
• 申請日: 2015-09-24
• 公開（公告）號: CN113279067A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 約瑟夫·鄧納姆
• 申請（專利權）人: 賽科恩斯生物科學公司;南加利福尼亞大學
• 主分類號: C40B40/06
• 分類號: C40B40/06;C40B50/06;C12P19/34
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 韋昌金;鄭霞

1.一種用于生成雙鏈銜接物的方法，所述雙鏈銜接物可選地包含序列條碼，所述方法包括，在單一反應容器或反應混合物中：

(a)將第一寡核苷酸庫與第二寡核苷酸庫相組合，其中所述第一寡核苷酸庫內的每個寡核苷酸可選地包含可切割5’端，其中所述第二庫中的每個寡核苷酸包含(i)與所述第一庫中的寡核苷酸的一部分互補的序列；(ii)位于與所述第一庫中的寡核苷酸的該部分互補的序列上游的可選條碼序列；和(iii)位于所述條碼上游的可切割5’端；

(b)使來自所述第一庫的寡核苷酸與來自所述第二庫的寡核苷酸雜交以形成雙鏈體；

(c)延伸來自所述第一庫的寡核苷酸，從而使來自所述第一庫的寡核苷酸與同所述可選的條碼序列互補并且與來自所述第二庫的寡核苷酸的可切割5’端互補的序列共價連接；

(d)切割所述可切割5’端以產生包含所述可選條碼序列并包含一個或多個突出端的雙鏈銜接物；以及，可選地，

(e)使所述雙鏈銜接物與包含一個或多個突出端的多個雙鏈核酸分子相連接。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第二寡核苷酸庫包含十二種或更多種不同的條碼序列。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述5’可切割端選自由以下組成的組：rA、rC、rG、rU或dU。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述條碼序列是隨機的。

5.根據權利要求3所述的方法，其中所述條碼序列是非隨機的。

6.根據權利要求3所述的方法，其中所述條碼序列是半簡并的。