[發(fā)明專利]一種磁控熒光生物傳感器的制備方法及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110251530.3
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112946278B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設計）人: 侯麗;黃娟娟;蔣高艷;林天然;趙書林
• 申請（專利權）人: 浙江東方基因生物制品股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/535;G01N21/64
• 代理公司: 北京云嘉湃富知識產(chǎn)權代理有限公司 11678
• 代理人: 陳順華

本發(fā)明公開了一種磁控熒光生物傳感器的制備方法及其應用，包括如下步驟：（1）制備磁控免疫探針MB?Ab；（2）制備脂質體包埋金簇復合物Biotin?Liposome/AuNCs；（3）制備適配體修飾的脂質體包埋金簇復合物，即Biotin?Liposome/AuNCs?Aptamer信號探針；（4）利用Biotin?Liposome/AuNCs?Aptamer信號探針結合磁控免疫探針構建檢測癌胚抗原CEA的多重信號放大磁控熒光生物傳感器；檢測時，先繪制傳感器檢測不同濃度的癌胚抗原的熒光信號工作曲線，再對臨床血清樣品中癌胚抗原的濃度進行檢測。本發(fā)明制備方法制備的磁控熒光生物傳感器抗干擾能力強，且具有高靈敏度和高選擇性，可用于檢測血清樣品中低豐度腫瘤標志物。

技術領域

本發(fā)明涉及生物傳感器，具體是一種基于多重信號放大的磁控熒光生物傳感器的制備方法及其應用。

背景技術

腫瘤標志物又叫腫瘤標記物，它是腫瘤發(fā)生和增殖的過程當中，由腫瘤細胞合成、釋放、分泌產(chǎn)生的，或者是因為宿主對腫瘤細胞的一種反應所產(chǎn)生的物質。通過腫瘤標志物的含量分析可以在臨床上輔助判斷是否有腫瘤，對于一些癌癥的早期發(fā)現(xiàn)很有幫助。此外，檢測腫瘤標志物還能對腫瘤病情篩查發(fā)展和治療之后的療效做監(jiān)測。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）因操作簡單、快速而成為檢測腫瘤標志物的一種主要方法，但檢測低豐度的腫瘤標志物往往需要進行信號放大步驟。因此，構建一種可檢測血清樣品中低豐度腫瘤標志物的高靈敏、高選擇性和抗干擾能力強的磁控熒光生物傳感器，對于癌癥的早期治療及預后療效有著重要的診斷意義。

在目前已經(jīng)公開檢測腫瘤標志物的相關專利中，CN109900911A一種運用核殼結構納米星檢測肝癌腫瘤標志物AFP的方法，用核殼結構納米星作為基底，通過表面增強拉曼散射原理來進行檢測，盡管方法靈敏性和特異性好，但是需要對基底進行多重修飾和官能團化，方法不夠簡便。

CN106807308A一種核殼結構的磁性納米粒子用于提取血清中腫瘤標志物的質譜分析方法，該方法利用磁性核殼材料從血清中富集分離腫瘤標志物，并用質譜分析方法定量，雖然可以進行快速高效的檢測，但是該方法特異性差，容易導致假陽性結果，且需要使用大型儀器以及進行樣品前處理，操作過程繁瑣復雜，儀器昂貴且龐大，無法滿足現(xiàn)場快速檢測的需求。

此外，現(xiàn)有基于信號放大用于靈敏檢測腫瘤標志物的傳感分析方法中，CN111351934A一種通過空心金納米球和納米花瓣狀二氧化錳共同修飾電極用于電化學檢測肺癌腫瘤標志物的方法，空心金納米球和納米花瓣狀二氧化錳的協(xié)同作用提高了電極比表面積并增大抗體吸附量，從而達到信號放大作用，提高了傳感器的靈敏度和選擇性，但需要對電極進行多重修飾，對方法的靈敏度有一定影響；CN108445213A一種納米復合探針用于血清腫瘤標志物的高靈敏熒光定量檢測方法，利用雙抗夾心法將納米復合探針固定，并將復合探針上的DNAzyme鏈循環(huán)利用起到熒光信號放大作用，但是該過程中直接將一抗固定于微孔板上，作用力較弱，且一抗與二抗可能產(chǎn)生交叉反應，對結果易造成大的干擾；CN111273025A一種基于葡萄糖氧化酶（GOD）介導的比色pH傳感檢測法，將磁分離、信號放大、信號轉換有效結合，實現(xiàn)對低豐度腫瘤目標物檢測，但是該法涉及到滾環(huán)擴增，需要大量輔助引物和DNA模板鏈，同時需要葡萄糖氧化酶的參與，價格昂貴，且酶的活性易隨環(huán)境變化不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足，提供了一種多重信號放大的可檢測血清中低豐度腫瘤標志物的磁控熒光生物傳感器的制備方法，制備的生物傳感器抗干擾能力強，且具有高靈敏度和選擇性。

本發(fā)明采用如下技術方案：

一種基于多重信號放大的磁控熒光生物傳感器的制備方法，包括如下步驟：

（1）制備磁控免疫探針（MB-Ab），利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與N-羥基丁二酰亞胺（NHS）交聯(lián)作用固定anti-CEA抗體在羧基化四氧化三鐵磁珠（MB）上；