[發明專利]一種磁控熒光生物傳感器的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202110251530.3
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112946278B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發明（設計）人: 侯麗;黃娟娟;蔣高艷;林天然;趙書林
• 申請（專利權）人: 浙江東方基因生物制品股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/535;G01N21/64
• 代理公司: 北京云嘉湃富知識產權代理有限公司 11678
• 代理人: 陳順華

1.一種磁控熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備磁控免疫探針MB-Ab，利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽EDC與N-羥基丁二酰亞胺NHS交聯作用固定anti-CEA抗體在羧基化四氧化三鐵磁珠MB上；

（2）制備脂質體包埋金簇復合物Biotin-Liposome/AuNCs；

（3）制備適配體修飾的脂質體包埋金簇復合物，即Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信號探針；

（4）利用Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信號探針結合磁控免疫探針構建檢測癌胚抗原CEA的多重信號放大磁控熒光生物傳感器，具體是利用MB-Ab磁控免疫探針分離富集血清樣品中的癌胚抗原，鏈霉親和素-生物素結合使包埋金納米簇的脂質體聚集，將其作為癌胚抗原傳感平臺的多重信號放大途徑，制備了檢測癌胚抗原的多重信號放大的磁控熒光生物傳感器；

檢測時，先繪制傳感器檢測不同濃度的癌胚抗原的熒光信號工作曲線，再對臨床血清樣品中癌胚抗原的濃度進行檢測。

2.根據權利要求1所述的磁控熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（1）所述制備MB-Ab磁控免疫探針，包括如下步驟：

（1.1）將MB超聲處理后經磁性分離，并用0.01M，pH為7.4的PBS洗滌2-3次；

（1.2）洗滌后加入EDC室溫下震搖10?min，接著加入NHS繼續震搖30?min，然后磁性分離并用pH為7.4的PBS洗滌2-3次，除去多余EDC和NHS，形成活化的MB并分散于PBS中；

（1.3）將anti-CEA抗體加入到活化的MB中并于室溫下震搖3?h，接著磁性分離和洗滌2-3次，除去多余抗體，然后分散在1?mL的2.0?wt%?BSA溶液中，室溫下震搖1?h，最后保存于4℃冰箱中；

所述EDC和NHS的質量濃度比為6.72:1；

所述MB和anti-CEA抗體的質量濃度比為100:1，體積比為20:1。

3.根據權利要求1所述的磁控熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（2）所述制備脂質體包埋金簇復合物Biotin-Liposome/AuNCs，包括如下步驟：

（2.1）將BSA加入燒杯中并用超純水溶解，接著于37℃恒溫水浴和強力攪拌條件下加入四氯金酸HAuCl₄溶液，2?min后再加入1?M?NaOH?溶液，用pH試紙調至pH值為12，于37℃恒溫水浴持續攪拌12?h得到金納米簇AuNCs，將獲得的AuNCs置于4℃的冰箱中保存待用；

（2.2）將二硬脂酰磷脂酰膽堿DSPC、磷脂聚乙二醇生物素DSPE-PEG-Biotin及膽固醇加入至50?mL?蒸餾瓶中，接著用3?mL?氯仿溶解，充分溶解后，在45℃條件下，通過旋轉蒸發儀蒸去氯仿，形成一層脂質體薄膜粘附在燒瓶內壁上；

（2.3）在形成的脂質體薄膜中加入AuNCs和PBS，并在45℃水浴條件下攪拌30?min，最后超聲5?min，即獲得Biotin-Liposome/AuNCs懸浮溶液，保存于4℃冰箱中；

所述BSA與HAuCl₄溶液的體積比為1:1；

所述DSPC、DSPE-PEG-Biotin及膽固醇的質量濃度比為41.5:1:6.5；

所述AuNCs和PBS的體積比為4:1。

4.根據權利要求1所述的磁控熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟（3）所述制備適配體修飾的脂質體包埋金簇復合物，即Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信號探針，具體方法是：

（3.1）取步驟（2）中制備的Biotin-Liposome/AuNCs懸浮溶液?加入100?ng/mL鏈霉親和素，混合震搖10?min；

（3.2）然后加入生物素化的CEA適配體50?μM，震搖30?min，獲得Biotin-Liposome/AuNCs-Aptamer信號探針，保存于4℃冰箱；

所述Biotin-Liposome/AuNCs與SA和CEA適配體的體積比為3:1.5:1。