[發明專利]唐古特虎耳草中二芳基壬烷類Ⅱ和Ⅰ自由基抑制劑及其分離制備工藝和應用

有效

• 申請號: 202110251348.8
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN113072603B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 黨軍;王啟蘭;陶燕鐸
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07H15/18
• 分類號: C07H15/18;C07H15/24;C07H1/08;A61P39/06;A23L33/105
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

1.唐古特虎耳草中二芳基壬烷類Ⅱ和Ⅰ自由基抑制劑，其特征在于，該二芳基壬烷類Ⅱ和Ⅰ自由基抑制劑呈棕黃色油狀，其名稱分別為二芳基壬烷類SaxitansideA和SaxitansideC自由基抑制劑，其分子式分別為C₂₇H₃₆O₁₁和C₂₇H₃₄O₁₁，其化學結構式分別為：

2.根據權利要求1所述的唐古特虎耳草中二芳基壬烷類Ⅱ和Ⅰ自由基抑制劑的分離制備工藝，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟1，提取：將唐古特虎耳草全草陰干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室溫下提取2～4次，每次2～4h，過濾、合并濾液，即濾液A，該濾液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草藥材的量＝1:5拌樣并減壓干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌樣樣品；

步驟2，微孔樹脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌樣樣品，該樣品經裝有微孔樹脂的中壓色譜分離，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中第四個主要的色譜峰餾分，該餾分經減壓干燥即得目標組分Fr4，其中，所述微孔樹脂柱的粗分離工作參數為：色譜柱柱長460mm、直徑49mm，微孔樹脂柱固定相為CHP20P，流動相A為水，B為乙醇，色譜條件為0～120min，0～100％B，120～150min，100％B，進樣量為40g，流速為30mL/min；

步驟3，在線自由基抑制劑組分篩選：在所述唐古特虎耳草目標組分Fr4中加入體積濃度為50～100％的甲醇進行溶解，配制樣品濃度為80.0～150.0mg/mL，經0.45μm微孔濾膜過濾，得到唐古特虎耳草目標組分Fr4樣品溶液，即濾液B，取1mL濾液B，利用在線HPLC-DPPH色譜聯用系統，篩選唐古特虎耳草目標組分Fr4中自由基抑制劑；其中，所述在線HPLC-DPPH色譜聯用系統，第一臺高效液相色譜儀采用耐純水C18(250×4.6mm，5μm)反相色譜柱，檢測波長為254nm；第二臺高效液相色譜儀進甲醇溶解的DPPH溶液，檢測波長為517nm；

步驟4，反相中壓色譜柱分離：唐古特虎耳草目標組分Fr4樣品溶液B按聚酰胺的量：唐古特虎耳草Fr4組分樣品的量＝1:1拌樣并減壓干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌樣樣品，該樣品經裝有反相填料的中壓色譜塔分離，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中第三個和第五個主要的色譜峰餾分，該餾分經減壓干燥即得目標組分Fr4-3和Fr4-5；其中，所述反相中壓色譜柱分離的工作參數為：色譜柱柱長500mm、直徑50mm，反相中壓色譜柱固定相為50μm的Spherical C18，流動相A為水，B為乙腈，色譜條件為0～90min，18～26％B，90～105min，26％B，進樣量為18g，流速為57mL/min；

步驟5，在線自由基抑制劑篩選：在唐古特虎耳草目標組分Fr4-3和Fr4-5中分別加入體積濃度為50～100％的甲醇進行溶解，配制樣品濃度為30.0～80.0mg/mL，經0.45μm微孔濾膜過濾，得到唐古特虎耳草目標組分Fr4-3和Fr4-5的溶液，即濾液C和D，分別取1mL濾液C和D，利用在線HPLC-DPPH色譜聯用系統篩選唐古特虎耳草目標組分Fr4-3和Fr4-5中自由基抑制劑；其中，所述在線HPLC-DPPH色譜聯用系統，第一臺高效液相色譜儀采用親水色譜柱XION(250×4.6mm，5μm)，檢測波長為254nm；第二臺高效液相色譜儀進甲醇溶解的DPPH溶液，檢測波長為517nm；

步驟6，高壓制備柱制備：所述濾液C和D分別經親水制備柱分離，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，分別收集制備色譜圖中對應的色譜峰餾分Fr4-3-3和Fr4-5-1，色譜峰餾分Fr4-3-3經減壓干燥即得含有二芳基壬烷類自由基抑制劑Saxitanside C的組分；色譜峰餾分Fr4-5-1經減壓干燥即得純度大于95％的二芳基壬烷類自由基抑制劑SaxitansideA；其中，親水制備柱分離的工作參數為：制備柱柱長250mm、直徑20mm，親水色譜柱固定相為5μm XION填料，流動相A為水溶液，流動相B為乙腈溶液，目標組分Fr4-3和Fr4-5分別按照0～60min，92％B和0～30min，91％B等度洗脫，進樣體積均為4mL，流速為19mL/min；

步驟7，Fr4-3-3的反相制備液相色譜純化：含有目標化合物Saxitanside C的組分用體積分數為50～100％的甲醇-水溶液溶解，配制樣品濃度為10.0～40.0mg/mL，經0.45μm微孔濾膜過濾，得到濾液，即濾液E，濾液E經反相制備液相色譜純化，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，收集濾液E制備色譜圖中第三個主要的色譜峰餾分，該色譜峰餾分Fr4-3-3-3經減壓干燥即得純度大于95％的二芳基壬烷類自由基抑制劑Saxitanside C；其中，反相制備柱制備的工作參數為：制備柱柱長250mm、直徑20mm，反相色譜柱固定相為5μm ReproSilC18填料，流動相A為水溶液，流動相B為乙腈溶液，目標組分Fr4-3-3按照0～32min，16％B等度洗脫，進樣體積為1mL，流速為19mL/min。