[發明專利]唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制劑及其分離制備工藝和應用

有效

• 申請號: 202110251346.9
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN113087608B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 黨軍;王啟蘭;陶燕鐸
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C07C49/255
• 分類號: C07C49/255;C07C49/248;C07C45/79;C07C45/80;A61P39/06;A23L33/105
• 代理公司: 青海省專利服務中心 63100
• 代理人: 周同永

1.唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制劑的分離制備工藝，其特征在于，具體包括如下步驟：

步驟1，提取：將唐古特虎耳草全草陰干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室溫下提取2～4次，每次2～4h，過濾、合并濾液，即濾液A，該濾液A按聚酰胺的量：唐古特虎耳草藥材的量＝1:5拌樣并減壓干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌樣樣品；

步驟2，微孔樹脂柱粗分：唐古特虎耳草提取物拌樣樣品，該樣品經裝有微孔樹脂的中壓色譜分離，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中第六個主要的色譜峰餾分，該餾分經減壓干燥即得目標組分Fr6，其中，所述微孔樹脂柱的粗分離工作參數為：色譜柱柱長460mm、直徑49mm，微孔樹脂柱固定相為CHP20P，流動相A為水，B為乙醇，色譜條件為0～120min，0～100％B，120～150min，100％B，進樣量為40g，流速為30mL/min；

步驟3，在線自由基抑制劑組分篩選：在所述唐古特虎耳草目標組分Fr6中加入體積濃度為80～100％的甲醇進行溶解，配制樣品濃度為50.0～120.0mg/mL，經0.45μm微孔濾膜過濾，得到唐古特虎耳草目標組分Fr6樣品溶液，即濾液B，取1mL濾液B，利用在線HPLC-DPPH色譜聯用系統，篩選唐古特虎耳草目標組分Fr6中自由基抑制劑；其中，所述在線HPLC-DPPH色譜聯用系統，第一臺高效液相色譜儀采用耐純水C18，250×4.6mm，5μm反相色譜柱，檢測波長為254nm；第二臺高效液相色譜儀進甲醇溶解的DPPH溶液，檢測波長為517nm；

步驟4，高壓反相色譜柱分離：唐古特虎耳草目標組分Fr6樣品溶液B按聚酰胺的量：唐古特虎耳草Fr6組分樣品的量＝2:1拌樣并減壓干燥，即得唐古特虎耳草提取物拌樣樣品，該樣品經裝有反相C18填料的制備柱分離，經檢測波長為254nm的紫外檢測器檢測，依次收集制備色譜圖中第一個Fr6-1、第二個Fr6-2和第三個Fr6-3色譜峰餾分，色譜峰餾分Fr6-1經減壓干燥即得純度大于95％的新的二芳基壬烷類自由基抑制劑SaxitansinB；色譜峰餾分Fr6-2經減壓干燥即得純度大于95％的新的二芳基壬烷類自由基抑制劑Saxitansin C；色譜峰餾分Fr6-3經減壓干燥即得純度大于95％的新的二芳基壬烷類自由基抑制劑Saxitansin D；其中，高壓反相制備柱制備的工作參數為：制備柱柱長250mm、直徑20mm，反相色譜柱固定相為5μm的耐純水C18填料，流動相A為水溶液，流動相B為乙腈溶液，目標組分Fr6按照0～50min，33％B等度洗脫，進樣量為0.4g，流速為19mL/min；

其中，所述的二芳基壬烷類Saxitansin B，Saxitansin C和Saxitansin D自由基抑制劑，分別命名為二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制，呈棕黃色油狀，其分子式分別為C₂₂H₂₈O₆，C₂₁H₂₄O₅和C₂₃H₃₀O₆，其化學結構式分別為：

2.根據權利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制劑的分離制備工藝，其特征在于，所述步驟1、步驟2和步驟4中，減壓干燥的條件均為：真空度50～250mbar，溫度40～60℃。

3.根據權利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制劑的分離制備工藝，其特征在于，所述步驟3中，所述步驟3中，第一臺高效液相色譜儀采用的流動相A為水溶液，流動相B為乙腈溶液，按照0～35min，33％B，流動相流速為1.0mL/min；第二臺高效液相色譜儀所使用的DPPH溶液濃度為50μg/mL，流動相流速為0.5mL/min；反應環長度為15m。

4.根據權利要求1所述的唐古特虎耳草中新的二芳基壬烷類Ⅴ，Ⅵ和Ⅶ自由基抑制劑的分離制備工藝，其特征在于，步驟3和4所述的耐純水C18反相色譜柱為耐純水ReprosilC18反相色譜柱或耐純水Megres C18反相色譜柱。