[發明專利]一種L-高絲氨酸生產菌株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 202110251258.9
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN113151127A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 謝新開;徐偉;劉婷
• 申請（專利權）人: 四川利爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 欒星明;王子楠

1.一種L-高絲氨酸生產菌株，其特征在于，所述L-高絲氨酸生產菌株中的thrB基因被弱化；thrL基因被敲除；thrA基因被突變為thrA*，且所述thrA*具有抑制產物的反饋抑制的特性；以及rhtA、thrA*、ppc、pntAB和asd基因被過表達或增強，其中所述rhtA的過表達或增強通過rhtA23實現，所述thrB基因的弱化通過thrB基因的氨基酸序列的R235H突變實現，所述thrA*是通過thrA基因的氨基酸序列的G433R突變實現。

2.根據權利要求1所述的L-高絲氨酸生產菌株，其特征在于，所述L-高絲氨酸生產菌株屬于大腸桿菌種屬。

3.一種權利要求1或2所述的L-高絲氨酸生產菌株的構建方法，其特征在于，包括任意順序的以下步驟：

A、弱化菌株中的thrB基因；

B、過表達菌株中的rhtA基因；

C、敲除菌株中的thrL基因；

D、突變菌株中的thrA基因為thrA*，所述thrA*具有抑制產物的反饋抑制的特性；

E、將含有thrA*基因、asd基因、pcc基因和pntAB基因的重組質粒轉入菌株中；

即獲得了L-高絲氨酸生產菌株；

其中所述rhtA的過表達通過rhtA23實現，所述thrB基因的弱化通過thrB基因的R235H突變實現，所述thrA*是通過thrA基因的氨基酸序列的G433R突變實現。

4.根據權利要求3中所述的L-高絲氨酸生產菌株的構建方法，其特征在于，所述步驟E中所述的菌株為大腸桿菌。

5.根據權利要求4所述的L-高絲氨酸生產菌株的構建方法，其特征在于，所述菌株為大腸桿菌K-12野生型MG1655。

6.權利要求1或2中所述的L-高絲氨酸生產菌株在生產L-高絲氨酸領域的應用。

7.一種生產L-高絲氨酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

取權利要求1或2中所述的L-高絲氨酸生產菌株，先將其接種至活化斜面培養基，培養8-16h后，再將其接種至種子培養基，培養7-12h后，最后，將其接種至發酵培養基中，發酵即得所述L-高絲氨酸。

8.根據權利要求7中所述的生產L-高絲氨酸的方法，其特征在于，進行發酵時，維持溫度在37±5℃、溶氧在30-40％，發酵液的pH值在7.0±0.5。

9.根據權利要求7或8中所述的生產L-高絲氨酸的方法，其特征在于，所述斜面培養基為LB培養基；所述種子培養基為TB培養基；所述發酵培養基包括如下成分：葡萄糖5-15g/L，玉米漿15-25g/L,糖蜜12-18g/L，甜菜堿0.1-0.5g/L,(NH₄)₂SO₄ 1-5g/L，KCl 1-5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-3g/L，MnSO₄·H₂O 0.01-0.1g/L，其余為水。

10.一種L-高絲氨酸生產菌株，其特征在于，所述L-高絲氨酸生產菌株中的thrB基因被弱化，所述thrB基因的弱化通過thrB基因的R235H突變實現。