[發明專利]一種聚山梨酯80含量的檢測方法

在審

• 申請號: 202110250370.0
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN113049727A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 余美倫;朱佳偉;宮佳欣;孟慶雪;傅文上;東立國;白瑩瑩;白雪峰;陶振明;趙君;吳藝婕;陳威威
• 申請（專利權）人: 哈爾濱瀚邦醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王煥

1.一種聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

預處理后的聚山梨酯80標準品的稀釋液和預處理后的供試品的稀釋液分別進行高效液相色譜檢測，根據所述標準品的檢測峰面積、所述供試品的檢測峰面積計算所述供試品中聚山梨酯80的含量；

所述聚山梨酯80標準品的預處理包括：將聚山梨酯80標準品溶液進行第一水解反應，再進行第一甲酯化反應；

所述供試品的預處理包括：將供試品溶液進行第二水解反應，再進行第二甲酯化反應。

2.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述第一水解反應包括：所述聚山梨酯80標準品溶液和堿液的混合液進行加熱處理；

優選地，所述聚山梨酯80標準品溶液和堿液的混合液進行加熱處理的溫度為65～75℃，時間為2.5～3.5h；

優選地，所述堿包括氫氧化鉀；

優選地，所述第一水解反應后采用酸進行中和處理。

3.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述第一甲酯化反應包括：所述水解反應后的上清液與硫酸-甲醇溶液的混合液進行加熱處理；

優選地，所述水解反應后的上清液與硫酸-甲醇溶液的混合液進行加熱處理的溫度為65～75℃，時間為0.8～1.2h；

優選地，所述第一甲酯化反應后采用堿調至pH為5～9；

優選地，采用0.45μm的濾膜對調至pH為5～9的混合物進行過濾。

4.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述第二水解反應包括：所述供試品溶液和堿液的混合液進行加熱處理；

優選地，所述供試品溶液和堿液的混合液進行加熱處理的溫度為65～75℃，時間為2.5～3.5h；

優選地，所述堿包括氫氧化鉀；

優選地，所述第二水解反應后采用酸進行中和處理。

5.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述第二甲酯化反應包括：所述水解反應后的上清液與硫酸-甲醇溶液的混合液進行加熱處理；

優選地，所述水解反應后的上清液與硫酸-甲醇溶液的混合液進行加熱處理的溫度為65～75℃，時間為0.8～1.2h；

優選地，所述第二甲酯化反應后采用堿調至pH為5～9；

優選地，采用0.45μm的濾膜對調至pH為5～9的混合物進行過濾。

6.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述供試品包括纖維蛋白原；

優選地，所述纖維蛋白原在所述預處理前進行如下濃縮處理：

纖維蛋白原溶液和乙醇-氯化鈉飽和溶液的混合液于離心管中進行第一離心處理，第一固液分離，并采用乙醇-氯化鈉飽和溶液清洗所述離心管；再進行第二離心處理，第二固液分離，并采用乙醇-氯化鈉飽和溶液清洗所述離心管；合并所述第一固液分離后的上清液、第二固液分離后的上清液及乙醇-氯化鈉飽和溶液清洗所述離心管后得到的洗液，進行第三離心處理；將所述第三離心處理后的上清液于50～60℃進行濃縮。

7.根據權利要求6所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述第一離心處理的轉速為2900～3100r/min，時間為8～12min；

優選地，所述第二離心處理的轉速為2900～3100r/min，時間為3～5min；

優選地，所述第三離心處理的轉速為2900～3100r/min，時間為20～30min。

8.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜的檢測條件包括：C8色譜柱；流動相為18～22mM磷酸二氫鉀-乙腈溶液；檢測波長為235～242nm；流速為0.8～1.2mL/min。

9.根據權利要求8所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，所述流動相為20mM磷酸二氫鉀-乙腈溶液；所述檢測波長為240nm；所述流速為1.0mL/min。

10.根據權利要求1所述的聚山梨酯80含量的檢測方法，其特征在于，檢測高效液相色譜的儀器包括安捷倫1260II高效液相色譜儀。