[發明專利]一種大腸桿菌冷凍干燥的質控小球的制備方法

在審

• 申請號: 202110250271.2
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN112961779A
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發明（設計）人: 李文星;萬逸
• 申請（專利權）人: 海南微氪生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: ?？谙柘鑼＠聞沼邢薰?46001
• 代理人: 莫臻

本發明提供了一種大腸桿菌冷凍干燥的質控小球的制備方法，包括制作含有大腸桿菌的菌泥、制作冷凍干燥保護劑、將冷凍干燥保護劑與菌泥混勻冷凍干燥制成凍干粉等步驟，最終制成具有高活性的質控小球。使用該質控小球進行病原微生物檢測，其檢測標準統一，檢測結果準確，具有可比較性。

技術領域

本發明涉及一種微生物的活性可控的保存方法，具體來說是一種大腸桿菌經冷凍干燥制得質控小球的方法。

背景技術

食源性污染包括31種不同的類型，例如微生物、病毒、毒素、寄生蟲以及化學物質等。食源性污染會導致數百種臨床疾病，全球每年因食源性污染導致的經濟損失高達數千億。在這些因素中，微生物污染是食源性污染的主要因素之一，嚴重影響著國民生命健康與經濟安全，開展病原微生物檢測和控制研究對國民經濟建設與健康管理有重要意義。

常見的病原微生物檢測方法包括平板培養、凝集實驗、分子擴增以及基于微生物生長代謝特性的光電傳感等，這些方法已經發展成為經典方法且已經取得了極為廣泛的應用。然而，除了平板培養的方式能夠以絕對定量的方式對病原微生物進行準確定量外，其他檢測方式均為半定量的檢測方式。因此，對于所有半定量方法或設備而言，病原微生物檢測前的質控便是極為重要的一環，檢測設備和方法的質控是保證設備和方法有效性的重要前提。這關系著病原微生物檢測結果的準確度以及不同方法、不同設備、甚至相同設備的不同機器之間檢測的精確度。通過微生物檢測方法或設備的質控，可以有效提高準確度與精確度，可以更好、更準確地判斷食品衛生情況，對食品的病原微生物污染程度做出正確評價，也可以為食品衛生相關的質控工作提供準確依據。

就目前的病原微生物檢測來看，不同方法所采用的檢測靶標與定量參數均不盡相同。如分子實驗，不同檢測機構可能會選擇微生物的不同靶標片段或使用不同的引物來進行分析，因此得到的不同結果的判斷也完全不同；再如微生物光電檢測儀，現在市場上的微生物光電檢測儀數量多、種類雜，如Tempo檢測儀、Bactrac檢測儀、Soleris檢測系統、PN-INS32型檢測儀、Biolog微生物鑒定系統和BAX System Q7檢測系統等，光電傳感的策略也有濁度、紫外吸光度、熒光等，不同儀器設備之間的結果更是無法放在同一標準下進行判斷。微生物的冷凍干燥保存是常用的微生物保存方法，但是在實際應用中，冷凍干燥過程中常常會導致不可控的微生物損傷，從而導致活性的不可控損失。而合適的冷凍干燥保護劑能夠有效緩解這一問題，因此，篩選合適的冷凍干燥保護劑是微生物保藏的重要一環，合適的冷凍干燥保護劑與冷凍干燥方法直接關系到微生物活性損失率的控制以及最終得到的質控小球中菌株數量的控制。

鑒于以上現狀，能夠明顯看出病原微生物檢測質控的重要性，為使檢測結果具備可對比性，統一的活體微生物質控小球和方法也顯得尤為重要。

發明內容

為解決上述問題，本發明的目的是提供一種大腸桿菌冷凍干燥的質控小球的制備方法，使用特制的冷凍干燥保護劑使得制得的質控小球具有高活性且方便保存和使用，保證后期檢測標準統一，檢測結果準確。

為達到上述目的，本發明所采取的技術手段為：

一種大腸桿菌冷凍干燥的質控小球的制備方法，包括以下步驟：

S1制作含有大腸桿菌的菌泥：使用營養肉湯培養增菌獲取得到大腸桿菌的菌液，分裝后制成菌泥待用。

其中步驟S1包括：

S11將獲取得到的菌液分裝為1mL/管；

S12分裝完成的菌液依次進行離心處理，去掉上清液；

S13加入1×PBS作為清洗液，重復離心處理，去掉上清液；

S14去除其中的培養基和代謝產物，再次進行離心處理得到菌泥。

進一步地，S12、S13和S14中進行離心處理時，菌液在8000rpm下保持10分鐘。