[發(fā)明專利]一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110250271.2
• 申請(qǐng)日: 2021-03-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112961779A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文星;萬(wàn)逸
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海南微氪生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/04
• 分類號(hào): C12N1/04;C12Q1/10;C12R1/19
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 46001
• 代理人: 莫臻

1.一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于包括一下步驟：

S1制作含有大腸桿菌的菌泥：使用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)增菌獲取得到大腸桿菌的菌液，分裝后制成菌泥待用；

S2制作冷凍干燥保護(hù)劑：分別量取預(yù)定量的水溶性糖、蛋白質(zhì)、表面活性劑、無(wú)機(jī)鹽和抗氧化劑，將上述組分分別加入無(wú)菌水中震蕩混合均勻得到水溶液作為冷凍干燥保護(hù)劑待用；

S3混合：向步驟S1的菌泥中添加步驟S2制作的冷凍干燥保護(hù)劑，其中冷凍干燥保護(hù)劑:菌泥的體積比為1:10，混合均勻得到混合液；

S4冷凍和干燥：將步驟S3制得的混合液經(jīng)過(guò)冷凍處理后，轉(zhuǎn)入冷凍干燥機(jī)徹底干燥，得到質(zhì)控小球保存?zhèn)溆谩?/p>

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于步驟S1包括：

S11將獲取得到的菌液分裝為1mL/管；

S12分裝完成的菌液依次進(jìn)行離心處理，去掉上清液；

S13加入1×PBS作為清洗液，重復(fù)離心處理，去掉上清液；

S14去除其中的培養(yǎng)基和代謝產(chǎn)物，再次進(jìn)行離心處理得到菌泥。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：S12、S13和S14中進(jìn)行離心處理時(shí)，菌液在8000rpm下保持10分鐘。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：S4中，冷凍處理為將混合液在-80℃的環(huán)境下冷凍5小時(shí)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：所述冷凍干燥保護(hù)劑中各組分的質(zhì)量濃度分?jǐn)?shù)為：2-5％的海藻糖、5-8％的脫脂奶粉、2-3％的甘油、4-5％的無(wú)機(jī)鹽、0.05-0.1％的抗氧化劑，其余為無(wú)菌水。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于，所述冷凍干燥保護(hù)劑中各組分的質(zhì)量濃度分?jǐn)?shù)為：2％的海藻糖、8％的脫脂奶粉、2％的甘油、5％的無(wú)機(jī)鹽、0.05％的抗氧化劑，其余為無(wú)菌水。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：所述無(wú)機(jī)鹽為谷氨酸鈉、氯化鈉、硫酸鈉、氯化鉀、氯化銨、碳酸鈣中的任意一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：所述抗氧化劑為維生素C、維生素E、亞硫酸鈉中的任意一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大腸桿菌冷凍干燥的質(zhì)控小球的制備方法，其特征在于：所述質(zhì)控小球通過(guò)添加生理鹽水或其他對(duì)大腸桿菌活性無(wú)損的溶液進(jìn)行重懸后，用于不同檢測(cè)設(shè)備或檢測(cè)方法的質(zhì)控。