[發明專利]一種重組溶瘤腺病毒及其應用

在審

• 申請號: 202110248832.5
• 申請日: 2021-03-08
• 公開（公告）號: CN115029325A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 魏繼武;王士群;董杰;吳靜怡
• 申請（專利權）人: 南京惟亞德生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/12;C12N15/24;A61K35/761;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 吳爽

本發明涉及腫瘤生物治療領域，具體涉及一種重組溶瘤腺病毒及其應用，該重組溶瘤腺病毒的基因組E1和E3區域缺失，缺失區域被穩定地插入膽固醇調控元件和免疫調節元件的外源核酸序列；其中，所述的膽固醇調控元件為包含APOA1基因或其簡并序列在內的功能元件；所述的免疫調節元件為包含選自GM?CSF、IFN?γ、IL2、IL7、IL12、IL15、IL16、IL18、IL21、IL22、IL27、IL28和IL29基因或其簡并序列在內的功能元件；所述的膽固醇調節元件和免疫調節元件的基因以非融合方式表達；所述的膽固醇調節元件和免疫調節元件是以可操作地連接方式連接至外源調控序列，包括啟動子序列、增強子序列和PA序列。該重組溶瘤病毒攜載的功能元件能夠協同穩定腫瘤微環境中的T細胞功能。

技術領域

本發明涉及腫瘤生物治療領域；具體涉及一種能有效抑制腫瘤生長、侵襲及轉移的溶瘤性腺病毒載體的制備，該載體可攜帶并表達膽固醇代謝調節分子和免疫共刺激分子的基因。

背景技術

一些野生減毒或基因改造的病毒株，因其具備在腫瘤中優勢復制的能力，并發揮直接溶瘤作用及誘導免疫活化作用，而被廣泛地應用到抗腫瘤治療領域中。然而，溶瘤病毒(OVs)單獨應用的治療效果不佳。為解決這個技術問題，現階段主要的技術方案是:1)優化OVs的骨架結構(如感染及復制相關基因)或材料包裹等方式以減少中和抗體對其清除，增加其對腫瘤組織感染、復制及傳播的病毒學表現；2)以OVs作為基因治療的載體，表達功能基因，發揮OVs和功能基因的協同作用(如OVs表達GM-CFS、IL-2、IL-12、IL-15等免疫共刺激分子，或/和PD1、PD-1L、CTLA-4、TIGIT等免疫檢查點調節劑)；3)OVs聯合放療、化療及其他免疫療法等第二療法(Nat Rev Cancer,2018,18(7):419-432；Curr Opin Biotechnol,2020,65:25-36)。

近年來研究發現，腫瘤微環境(TME)中腫瘤細胞對某些代謝底物的優勢競爭，以及代謝產物的排出堆積能夠抑制免疫系統正常功能的發揮(Cell,2015,162(6):1229-41)。由此，延伸出一系列新的免疫治療靶點：代謝-免疫調控軸。特別是以OVs所介導的免疫治療，活病毒感染腫瘤細胞后，子代病毒的復制及功能基因的表達均加速TME中營養素的消耗和代謝副產物的堆積。這些由腫瘤發展及OVs干預所誘導的代謝環境惡化，削弱了OVs及其攜載的免疫調節劑所介導的抗腫瘤免疫應答(Mol Ther,2020,28(6)1417-1421；Front CellInfect Microbiol,2019,9:95)。因此，修正失常的TME中代謝穩態成為OVs療法亟需解決的問題。

目前，靶向代謝重編程以提高OVs療效的技術方案主要集中在修正糖代謝TCA循環的失常，如乳酸堆積，OVs聯合PDK抑制劑DCA，重組溶瘤痘苗病毒(oVV)表達leptin(oVV-leptin)(Cancer Res,2019,79(15):3824-3836；Immunity,2019,51(3):548-560)。2019年，《Cell Metabolism》雜志研究報道，TME微環境中膽固醇堆積能夠誘導抗腫瘤細胞毒性T淋巴細胞(CTL)上的免疫檢查點上調，從而加速誘導CTL功能耗竭(Cell Metab,2019,30(1):143-156)。申請者在此研究的基礎之上，在溶瘤腺病毒Ad5上創造性地整合了膽固醇代謝調控元件APOA1，獲得重組APOA1溶瘤腺病毒Ad5(Ad5-APOA1)。與Ad5-con相比，該Ad5-APOA1通過APOA1修正了TME中的富集的膽固醇，而協同抑制乳腺癌等腫瘤生長和轉移(PCT/CN2020/078360)。然而，Ad5-APOA1方案對某些腫瘤中應答不夠完全。為了解決這個問題，申請人采取進一步優化技術方案，旨在Ad5-APOA1骨架上進一步整合免疫調節因子，即共表達膽固醇調控元件及免疫調節元件。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種重組溶瘤腺病毒及其應用。本發明的技術方案免疫應答效應溫和，有利于溶瘤細胞在腫瘤細胞內早期的復制和功能基因的表達，而且膽固醇調控元件與免疫調控元件能夠產生協同促進長效免疫記憶的形成。