[發(fā)明專利]一種測(cè)定配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110248240.3
• 申請(qǐng)日: 2021-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN112858561A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周紅;張麗宏;張秋梅;盧雁;唐曉娜;于力濤;楊金寶;鄂來(lái)明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江省綠色食品科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務(wù)所 23118
• 代理人: 陳曉光

一種測(cè)定配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法。現(xiàn)有技術(shù)用光密度計(jì)對(duì)按分子量順序分離開的酪蛋白與乳清蛋自各譜帶進(jìn)行測(cè)定，求得酪蛋白與乳清蛋白的含量比率，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性和精密度差。本發(fā)明其方法包括如下步驟：將被測(cè)樣品經(jīng)6mol/L鹽酸于110℃水解22小時(shí)，水解溶液定容50mL后過(guò)濾，樣品濾液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液同時(shí)用衍生劑衍生，衍生物經(jīng)高效液相色譜儀或超高效液相色譜儀分離、紫外檢測(cè)器檢測(cè)，測(cè)定出纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸的含量，樣品中酪蛋白含量與其所含的兩種氨基酸含量比值存在二次函數(shù)的曲線關(guān)系，用不同含量的酪蛋白值與其所含的纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸中兩種氨基酸比值制作兩個(gè)定量曲線方程。本發(fā)明用于測(cè)定嬰兒配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及嬰兒乳粉配方技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測(cè)定配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法。背景技術(shù)

目前使用GB/T 5413.2- 1997《嬰幼兒配方食品和乳粉乳清蛋白的測(cè)定》，測(cè)定嬰兒配方粉中酪蛋白/乳清蛋白的比例,試樣用SDS-聚苯烯酸胺凝膠電泳(SDS-PAGE,Laemmli法)后，現(xiàn)有技術(shù)用光密度計(jì)對(duì)按分子量順序分離開的酪蛋白與乳清蛋白各譜帶進(jìn)行測(cè)定，求得酪蛋白與乳清蛋白的含量比率，該項(xiàng)技術(shù)可操作性差，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性和精密度差。本申請(qǐng)?zhí)钛a(bǔ)了嬰兒配方乳粉酪蛋白和乳清蛋白測(cè)定的技術(shù)缺陷，可操作性強(qiáng)、大大提高了方法的準(zhǔn)確性和精密度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種測(cè)定配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法，該方法是配制一組定量樣品，選擇三種氨基酸，同時(shí)制作兩條定量曲線，能夠達(dá)到測(cè)定效率高，事半功倍的功效。

上述的目的通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種測(cè)定配方乳粉中酪蛋白含量的雙曲線法，該方法包括如下步驟：首先是將被測(cè)樣品經(jīng)6mol/L鹽酸于110℃水解22小時(shí)，水解溶液定容50mL后過(guò)濾，樣品濾液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液同時(shí)用衍生劑衍生，衍生物經(jīng)高效液相色譜儀或超高效液相色譜儀分離、紫外檢測(cè)器檢測(cè)，測(cè)定出纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸的含量，樣品中酪蛋白含量與其所含的兩種氨基酸含量比值存在二次函數(shù)的曲線關(guān)系，用不同含量的酪蛋白值與其所含的纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸中兩種氨基酸比值制作兩個(gè)定量曲線方程，將被測(cè)樣品中測(cè)得的相應(yīng)氨基酸比值分別帶入相應(yīng)的曲線方程，計(jì)算出兩個(gè)酪蛋白含量值，取平均值為測(cè)定結(jié)果；

（1）試樣的制備

A、氨基酸試樣制備：稱取適量樣品，其中蛋白質(zhì)含量為10.0～30.0mg，置于帶密封墊螺紋蓋水解管中，向水解管內(nèi)加45℃～50℃的溫水6mL，輕輕震蕩溶解樣品，再加入濃鹽酸6 mL，輕震混勻，充入氮?dú)?min后，擰緊螺絲蓋，將水解管放在110℃±1℃的恒溫干燥箱內(nèi)水解22 h后取出冷卻至室溫；將水解液用超純水轉(zhuǎn)移并定容至50 mL容量瓶中，殘液洗三次，洗液合并后定容，混勻，濾紙過(guò)濾，吸取濾液1 mL放入指型瓶中，在60 ℃±2 ℃氮吹儀上濃縮至干或在低于50 ℃下減壓蒸餾至干，殘留物用1 mL超純水溶解，即為試樣溶液；

B、游離氨基酸試樣制備：準(zhǔn)確稱取混合均勻的樣品約2.5 g，精確至0.0001 g放入100 mL錐形瓶中，加入約25 mL45 ℃~50 ℃溫水溶解，降至室溫后用鹽酸溶液調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至1.7±0.1，放置約1 min，再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)樣品溶液的pH值至4.5±0.1，超聲振蕩約10 min，用水轉(zhuǎn)移并定容至50 mL容量瓶中混勻，濾紙過(guò)濾后經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，濾液即為試樣溶液；

（2）曲線的制作

A、氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：將標(biāo)準(zhǔn)工作液衍生液注入到超高效液相色譜儀或高校液相色譜儀中，得到氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度μmol/mL為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，該曲線用于計(jì)算各氨基酸濃度和含量，其中含量以每100克蛋白質(zhì)中氨基酸所含克數(shù)表示。

、樣品定量計(jì)算的雙曲線制作：以配制的不同酪蛋白含量為縱坐標(biāo)，以上機(jī)測(cè)定后得到的纈氨酸/丙氨酸、纈氨酸/脯氨酸或其比值的倒數(shù)為橫坐標(biāo)，分別制定兩個(gè)定量計(jì)算曲線，即雙曲線，得到兩個(gè)曲線方程，要求相關(guān)系數(shù)平方值≥0.9980；

（3）樣品溶液的測(cè)定