[發明專利]一種新型冠狀病毒2019-nCoV引物探針組合、核酸檢測試劑盒及其試劑盒使用方法

在審

• 申請號: 202110243963.4
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN112831607A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 楊孫孝;朱兆奎;趙百慧;張春雷
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

本發明的一種新型冠狀病毒2019?nCoV引物探針組合、核酸檢測試劑盒及其試劑盒使用方法，試劑盒包括核酸擴增反應液、酶混合液、ORF1ab/N反應液、陽性對照和陰性對照，所述ORF1ab/N反應液設有內參。陽性對照參與提取和RT?PCR擴增的過程，監控提取和擴增過程。內參可用于對樣本采集、保存和運輸以及核酸提取過程進行監控，避免假陰性結果的誤判。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體來說是一種新型冠狀病毒2019-nCoV引物探針組合、核酸檢測試劑盒及其試劑盒使用方法。

背景技術

嚴重急性呼吸系統綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)屬于冠狀病毒(Coronavirus)，是引起2019冠狀病毒病疫情的病原體。冠狀病毒是一類在動物與人類之間傳播的人畜共患的單鏈RNA病毒，冠狀病毒可感染哺乳動物、鳥類，引起牛和豬的消化道疾病或雞的上呼吸道疾病。在SARS-CoV-2發現之前，自然界常見，已知可感染人類的冠狀病毒共有六種，低危型的有4種，主要引起感冒癥狀，它們分別是人類冠狀病毒229E(HCoV-229E)、人類冠狀病毒OC43(HCoV-OC43)、人類冠狀病毒NL63(HCoV-NL63)、人類冠狀病毒HKU1(HCoV-HKU1)；高危型有2種，嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒(SARS-CoV)和中東呼吸綜合癥冠狀病毒(MERS-CoV)。目前實驗室診斷方法有抗原檢測與核酸檢測等容易產生實驗室污染，對于反應的質量難以把控。

發明內容

本發明的目的在于解決現有的一種新型冠狀病毒2019-nCoV引物探針組合、核酸檢測試劑盒及其試劑盒使用方法，以解決實驗室產物污染和對于反應的質量難以把控的問題。

為達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

一種新型冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，所述ORF1ab基因和N基因的引物探針序列如下表所示。

優選的，根據ORF1ab基因和N基因設計的內參引物探針序列為：

內參上游引物的序列為：AGATTTGGACCTGCGAGCG；

內參下游引物的序列為：GAGCGGCTGTCTCCACAAGT；

內參探針的序列為：TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

本發明提供一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，包括核酸擴增反應液、酶混合液、ORF1ab4/N反應液、陽性對照和陰性對照，所述新型冠狀病毒通用型反應液設有內參。

優選的，所述核酸擴增反應液包括擴增增強的添加劑，其中擴增增強的添加劑包括4-8％的DMSO、20-80mg/ml的BSA、0.5-1M的海藻糖。

優選的，所述酶混合液包括UNG酶1U、DNA聚合酶2.5U、逆轉錄酶200U、RNA酶抑制劑40U和酶稀釋液。

優選的，所述ORF1ab/N反應液包括新型冠狀病毒ORF1ab基因上游引物、新型冠狀病毒ORF1ab基因下游引物、新型冠狀病毒ORF1ab基因探針(FAM)、新型冠狀病毒N基因上游引物、新型冠狀病毒N基因下游引物、新型冠狀病毒N基因探針(VIC)、內參上游引物、內參下游引物、內參探針(ROX)和DEPC水。

優選的，所述陽性對照包括新型冠狀病毒2019-nCoV ORF1ab基因和N基因片段的病毒樣顆粒、RnaseP病毒樣顆粒和TE Buffer，所述陰性對照為0.9％的氯化鈉溶液。

本發明還提供一種新冠病毒核酸檢測試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

S10、預處理，分別取出核酸擴增反應液、酶混合液、新冠病毒引物探針反應液、陽性對照和陰性對照，并在室溫下熔化，充分振蕩混勻后瞬間離心；