[發明專利]一種新型冠狀病毒2019-nCoV引物探針組合、核酸檢測試劑盒及其試劑盒使用方法

在審

• 申請號: 202110243963.4
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN112831607A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 楊孫孝;朱兆奎;趙百慧;張春雷
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

1.一種新型冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于：所述ORF1ab基因和N基因的引物探針序列如下表所示。

2.根據權利要求1所述的一種新型冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于：根據ORF1ab基因和N基因設計的內參引物探針序列為：

內參上游引物的序列為：AGATTTGGACCTGCGAGCG；

內參下游引物的序列為：GAGCGGCTGTCTCCACAAGT；

內參探針的序列為：TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

3.一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，其特征在于：包括核酸擴增反應液、酶混合液、ORF1ab/N反應液、陽性對照和陰性對照，所述新型冠狀病毒通用型反應液設有內參。

4.根據權利要求3所述的一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述核酸擴增反應液包括擴增增強的添加劑，其中擴增增強的添加劑包括4-8％的DMSO、20-80mg/ml的BSA、0.5-1M的海藻糖。

5.根據權利要求3所述的一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述酶混合液包括UNG酶1U、DNA聚合酶2.5U、逆轉錄酶200U、RNA酶抑制劑40U和酶稀釋液。

6.根據權利要求3所述的一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述ORF1ab/N反應液包括新型冠狀病毒ORF1ab基因上游引物、新型冠狀病毒ORF1ab基因下游引物、新型冠狀病毒ORF1ab基因探針(FAM)、新型冠狀病毒N基因上游引物、新型冠狀病毒N基因下游引物、新型冠狀病毒N基因探針(VIC)、內參上游引物、內參下游引物、內參探針(ROX)和DEPC水。

7.根據權利要求3所述的一種新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照包括新型冠狀病毒2019-nCoV ORF1ab基因和N基因片段的病毒樣顆粒、RnaseP病毒樣顆粒和TE Buffer，所述陰性對照為0.9％的氯化鈉溶液。

8.一種新冠病毒核酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：包括如下步驟：

S10、預處理，分別取出核酸擴增反應液、酶混合液、新冠病毒引物探針反應液、陽性對照和陰性對照，并在室溫下熔化，充分振蕩混勻后瞬間離心；

S20、配置反應液并放在PCR反應管中，每個PCR反應管中20μL；

S30、進行樣本核酸提??；

S40、加樣，向配置的反應液中分別加入待測樣本、陽性對照和陰性對照核酸各5μL，蓋緊管蓋，瞬時離心；

S50、擴增檢測，將PCR反應管放置在熒光定量PCR儀中進行擴增檢測；

S60、試劑盒中的檢測靶標對應的陰性對照、陽性對照以及試劑盒中的內參基因檢測同時滿足要求時，進行檢測樣本的陰陽性判斷。

9.根據權利要求8所述的一種新冠病毒核酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S50中逆轉錄在50℃下循環1cycle 15min；

所述步驟S50中預變性在95℃下循環1cycle 15min；

所述步驟S50中變性在95℃下循環45cycle 15min；

所述步驟S50中退火/延伸/熒光檢測在55℃下循環45cycle 15min。