[發明專利]一種定點突變的水稻隱色素及其構建方法

有效

• 申請號: 202110243351.5
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112899244B
• 公開（公告）日: 2023-02-21
• 發明（設計）人: 朱國萍;劉莉;王鵬;文斌;徐蕾;胡德港;王孟黎;陳雪霏;卞命杰
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 范奇

1.一種水稻隱色素定點突變蛋白的編碼基因，其特征在于：該基因是由SEQ ID NO:1，所示的核苷酸序列組成。

2.一種定點突變的水稻隱色素蛋白，其特征在于：該蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種載體，其特征在于：其含有權利要求1所述的核苷酸序列。

4.一種宿主細胞，其特征在于：其含有權利要求2所述的氨基酸序列。

5.一種宿主細胞，其特征在于：其含有權利要求3所述的載體。

6.權利要求2所述的一種定點突變的水稻隱色素蛋白的構建方法，包括以下步驟：從基因庫中獲得基因序列，進行人工密碼子優化并且進行蛋白質羧基端截短，獲得目的基因序列與pET22b質粒連接，構建出重組表達質粒；設計突變引物，利用重組質粒進行定點突變，并將突變后的重組質粒轉化到大腸桿菌感受態細胞，構建出用于水稻隱色素蛋白表達的基因工程菌Rosetta(DE3)/pET22b-D393N；在20 ^oC180 rpm和1 mM IPTG條件下獲得了表達；

突變引物分別為：

D393N S: 5' CGCGGATCTGGAAAGCAATATCCTGGGCTG 3'

D393N AS: 5' TGCTTTCCAGATCCGCGTCCAGCAGCA 3'。