[發明專利]快速檢測耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌gyrA突變體的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202110243233.4
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN113046449A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 米凱霞;白雪揚;胡新玲;周心童;蔣政
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/34
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.核酸分子組合物，由6種DNA分子組成；6種DNA分子均為單鏈DNA分子，分別如序列表的序列2至序列表的序列7所示。

2.權利要求1所述核酸分子組合物在鑒定或輔助鑒定耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌中的應用。

3.權利要求1所述核酸分子組合物在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為鑒定或輔助鑒定耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌。

4.一種試劑盒，包括權利要求1所述核酸分子組合物；所述試劑盒的功能為鑒定或輔助鑒定耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌。

5.權利要求4所述試劑盒在鑒定或輔助鑒定耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌中的應用。

6.一種鑒定或輔助鑒定耐氟喹諾酮類藥物的恥垢分枝桿菌的方法，包括如下步驟：

將供試恥垢分枝桿菌或其基因組DNA作為模板，分別進行四個體系的PCR擴增；

第一個體系中采用的引物由上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPA91V組成；

第二個體系中采用的引物由上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPS92P組成；

第三個體系中采用的引物由上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPD95G組成；

第四個體系中采用的引物由上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPD95Y組成；

上游引物為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；下游引物為序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；錯配下游引物_SNPA91V為序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；錯配下游引物_SNPS92P為序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；錯配下游引物_SNPD95G為序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；錯配下游引物_SNPD95Y為序列表的序列7所示的單鏈DNA分子。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于：PCR擴增的反應體系中加入甘油作為保護劑。

8.如權利要求6或7所述的方法，其特征在于：

第一個體系中，上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPA91V的摩爾配比為：8:2:12；

第二個體系中，上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPS92P的摩爾配比為：8:2:12；

第三個體系中，上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPD95G的摩爾配比為：8:1:12；

第四個體系中，上游引物、下游引物和錯配下游引物_SNPD95Y的摩爾配比為：8:1:12。

9.如權利要求6或7或8所述的方法，其特征在于：

第一個體系的PCR擴增的反應程序：98℃3min；98℃30s、55℃40s、72℃30s，30個循環；72℃5min；16℃2min；

第二個體系的PCR擴增的反應程序：98℃3min；98℃30s、65℃40s、72℃30s，30個循環；72℃5min；16℃2min；

第三個體系的PCR擴增的反應程序：98℃3min；98℃30s、58℃40s、66℃30s，30個循環；72℃5min；16℃2min；

第四個體系的PCR擴增的反應程序：98℃3min；98℃30s、62℃40s、72℃30s，30個循環；72℃5min；16℃2min。