[發明專利]一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法

有效

• 申請號: 202110242807.6
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113046311B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 宋爾衛;蘇士成;陳惠萍
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法，在誘導多能干細胞中過表達轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt、轉錄因子Batf3、轉錄因子Nfil3中的至少一種。本發明利用干細胞技術構建誘導多能干細胞系克服了對不同階段淋巴祖細胞的轉錄因子基因報告小鼠的構建需求，并且通過穩定過表達特定轉錄因子組合提高分化的可重復性，提高誘導所得淋巴組織誘導細胞的功能完整性。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其是涉及一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法。

背景技術

誘導多能干細胞(Induced Pluripotent Stem Cells,iPSCs)是近年來干細胞研究領域中具有里程碑意義的突破。其是通過異位表達幾個與維持胚胎干細胞(EmbryonicStem Cells，ESCs)多潛能性相關的關鍵性核轉錄因子，使體細胞發生重編程，得到的一種類似ESCs的多潛能細胞，可以在體內外分化為三胚層的所有組織細胞。由體細胞重編程而來的iPSCs為獲得與患者自身遺傳背景一致的多能干細胞增加了一個新途徑，且不再使用人類早期胚胎和卵母細胞，故倫理學的爭論將隨之平息，核移植技術缺乏卵母細胞和技術繁雜的窘境也得到了合理的解決。是組織工程和再生醫學、疾病模型、藥物篩選的理想種子細胞，因此具有廣闊的臨床應用背景。目前，研究者已在體外將人iPSCs向各種組織細胞誘導分化，如造血干/祖細胞、紅細胞、T細胞、B細胞、心肌細胞、胰島β細胞、肝臟細胞等；建立了多種遺傳性疾病人iPSCs疾病模型，用于發病機制的研究，并在動物模型上嘗試通過對有遺傳缺陷的iPSCs進行基因改造，治療遺傳性疾病；建立多種腫瘤iPSCs疾病模型，用于發病機制的研究和藥物篩選。

天然免疫淋巴細胞(innate immune cells，ILCs)是一群在淋巴結發育、組織損傷修復、抗微生物感染等過程中發揮重要作用的天然免疫細胞，其功能失調與過敏性疾病、慢性感染、代謝性疾病、腫瘤等多種疾病密切相關。淋巴組織誘導細胞(LTiCs)是一種對人和小鼠外周淋巴組織發育必不可少的新型天然淋巴細胞，現有文獻中涉及淋巴組織誘導細胞或天然免疫淋巴細胞的研究常常需要構建轉基因小鼠，從活體分離淋巴祖細胞，然后在體外通過添加細胞因子誘導不同先天免疫淋巴細胞亞群及淋巴組織誘導細胞分化，但是從活體分離淋巴祖細胞(common lymphoid progenitor)，成本高，周期長，分化效率低，可重復性低。2006年8月，Yamanaka實驗室利用外源表達Oct4，Sox2，c-Myc，Klf4 四個轉錄因子，成功誘導小鼠胚胎成纖維細胞為類似小鼠胚胎干細胞的“可誘導的多能干細胞”，這項實驗結果說明分化細胞可以通過幾個轉錄因子誘導，重編碼到全能性的狀態，目前暫無相關文獻報道從小鼠誘導多能干細胞通過體外克隆培養誘導分化淋巴組織誘導細胞。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種誘導多能干細胞體外誘導定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法，利用干細胞技術構建誘導多能干細胞系克服了對不同轉錄因子基因報告小鼠的構建需求，并且通過穩定過表達特定轉錄因子組合提高分化的可重復性，提高誘導所得淋巴組織誘導細胞的功能完整性。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法，在誘導多能干細胞中過表達轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt、轉錄因子Batf3、轉錄因子Nfil3中的至少一種。

本發明發明人經過大量研究及試驗發現，通過過表達轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt、轉錄因子Batf3、轉錄因子Nfil3中的至少一種，可使得誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞，可重復性高，并且淋巴組織誘導細胞的功能完整性較高，具有本體細胞的功能特征。

作為本發明所述方法的優選實施方式，在誘導多能干細胞中過表達轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt、轉錄因子Batf3和轉錄因子Nfil3。