[發明專利]一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法

有效

• 申請號: 202110242807.6
• 申請日: 2021-03-03
• 公開（公告）號: CN113046311B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 宋爾衛;蘇士成;陳惠萍
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞的方法，其特征在于，在誘導多能干細胞中過表達轉錄因子組合；

所述轉錄因子組合為：

Runx1、轉錄因子Id2和轉錄因子Rorγt；或

轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2和轉錄因子Rorγt；或

轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt和轉錄因子Nfil3；或

轉錄因子Runx1、轉錄因子Tcf1、轉錄因子Id2、轉錄因子Rorγt、轉錄因子Batf3和轉錄因子Nfil3。

2.如權利要求1所述的方法，所述編碼轉錄因子Runx1的基因為Runx1基因；所述編碼轉錄因子Tcf1的基因為Tcf7基因；所述編碼轉錄因子Id2的基因為Id2基因，所述編碼轉錄因子Rorγt的基因為Rorc基因，所述編碼轉錄因子Batf3的基因為Batf3基因，所述編碼轉錄因子Nfil3的基因為Nfil3基因。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.構建表達權利要求1中所述轉錄因子組合的表達載體；

S2.將步驟S1構建得到的表達載體轉至誘導多能干細胞中，然后在分化培養基組中培養，收集分化獲得的淋巴組織誘導細胞。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述分化培養基組包括第一分化培養基、第二分化培養基、第三分化培養基和第四分化培養基，所述第一分化培養基包括胎牛血清、IMDM、谷氨酰胺、抗壞血酸和骨形態發生蛋白4，所述第二分化培養基包括胎牛血清、IMDM、谷氨酰胺、抗壞血酸、骨形態發生蛋白4和血管內皮生長因子，所述第三分化培養基包括胎牛血清、IMDM、谷氨酰胺、抗壞血酸、KL、FL、IL-3和IL-6，所述第四分化培養基包括胎牛血清、IMDM、谷氨酰胺、抗壞血酸、KL、FL和IL-7。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述表達載體為慢病毒表達載體。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，將步驟S1構建得到的表達載體轉至誘導多能干細胞中后還含有檢測權利要求1中所述轉錄因子組合的步驟。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述檢測轉錄因子Runx1的擴增引物為SEQIDNO:1-SEQ ID NO:2，所述檢測轉錄因子Tcf1的擴增引物為SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:4，所述檢測轉錄因子Id2的擴增引物為SEQ ID NO:5-SEQ ID NO:6，所述檢測轉錄因子Rorγt的擴增引物為SEQ ID NO:7-SEQ ID NO:8，所述檢測轉錄因子Batf3的擴增引物為SEQ IDNO:9-SEQ ID NO:10；所述檢測轉錄因子Nfil3的擴增引物為SEQ ID NO:11-SEQ ID NO:12。

8.如權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，利用過表達的權利要求1中所述轉錄因子組合將誘導多能干細胞定向分化為淋巴組織誘導細胞。