[發明專利]標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法、試劑條及試劑盒

在審

• 申請號: 202110242414.5
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN112858677A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 楊帆;曲文英;鄭雯雯;梁莉甜;楊明霞
• 申請（專利權）人: 山東康華生物醫療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/577
• 代理公司: 濰坊盛潤知識產權代理事務所(普通合伙) 37299
• 代理人: 李光林

本發明涉及一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，標記方法包括以下步驟：（1）制備膠體金溶液；（2）將制備好的膠體金溶液調節pH值至低于最適pH值1.0～1.5；（3）一次性加入標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體，加入量低于最適標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量的60%～70%；（4）加入封閉劑和穩定劑，標記結束；打破安全范圍，把免疫金放在一個相對不穩定但可控條件下，可明顯提升產品顯色強度和靈敏度，上述“相對不穩定但可控條件”指膠體金標記pH值略低于待標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體等電點，標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量為不飽和量，以及封閉劑和穩定劑的同時加入，最終體現在產品上顯色強度明顯加深，靈敏度顯著提高。

技術領域

本發明屬于金免疫技術領域，具體涉及一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法、試劑條及試劑盒。

背景技術

金免疫技術是一種以膠體金作為標記物的免疫標記技術，膠體金是氯金酸在還原劑的作用下，形成的帶負電的疏水膠溶液，該溶液由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，即為膠體金，膠體金表面帶負電荷，蛋白質的正電荷基團因靜電吸附力而包被到膠體金顆粒表面，此過程即為膠體金標記，也稱為金免疫。

免疫金的特性主要受金顆粒、標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量、pH值影響，最適標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量一般為標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體完全吸附于膠體金的最大量， 最適pH值一般為接近或略高于待標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的等電點，但最適標記狀態僅能夠保證免疫金的穩定性，無法在免疫層析法中明顯提升產品顯色強度和靈敏度。

發明內容

本發明要解決的技術問題是針對以上不足，提供一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，通過該方法可以提升產品顯色強度和靈敏度。

還提供一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的試劑條，其檢測靈敏度高、顯色速度快，顯色強度好。

還提供一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的試劑盒，其使用便捷、操作簡單。

為了解決以上技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，標記方法包括以下步驟：

（1）制備膠體金溶液；

（2）將制備好的膠體金溶液調節pH值至低于最適pH值1.0～1.5；

（3）一次性加入標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體，加入量低于最適標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量的60%～70%；

（4）加入封閉劑和穩定劑，標記結束。

作為一種優化方案，步驟（3）中標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體加入時間為1s。

作為一種優化方案，步驟（3）中的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的加入量為：

每1mL膠體金溶液加入3.6~4.2μg抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體，反應時間為10min。

作為一種優化方案，步驟（2）中調節pH值所用溶液為錫酸鉀溶液，用錫酸鉀溶液將膠體金溶液pH值調至5.5~6.0。

錫酸鉀溶液制備方法為稱取2g錫酸鉀，室溫溶于100mL超純水，用0.22μm濾膜過濾，4℃保存備用。

作為一種優化方案，步驟（1）中膠體金溶液為采用檸檬酸三鈉還原法制備的萬分之二的納米金。

作為一種優化方案，步驟（1）中膠體金溶液的制備方法為：

氯金酸溶液：將10g氯金酸溶于超純水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存備用。

檸檬酸三鈉溶液：稱取1g檸檬酸三鈉，室溫溶于100mL超純水，用0.22μm濾膜過濾，4℃保存備用。