[發明專利]標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法、試劑條及試劑盒

在審

• 申請號: 202110242414.5
• 申請日: 2021-03-05
• 公開（公告）號: CN112858677A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 楊帆;曲文英;鄭雯雯;梁莉甜;楊明霞
• 申請（專利權）人: 山東康華生物醫療科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/532;G01N33/577
• 代理公司: 濰坊盛潤知識產權代理事務所(普通合伙) 37299
• 代理人: 李光林

1.一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：標記方法包括以下步驟：

（1）制備膠體金溶液；

（2）將制備好的膠體金溶液調節pH值至低于最適pH值1.0～1.5；

（3）一次性加入標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體，加入量低于最適標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體用量的60%～70%；

（4）加入封閉劑和穩定劑，標記結束。

2.如權利要求1的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（3）中標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體加入時間為1s。

3.如權利要求1的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（3）中的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的加入量為：

每1mL膠體金溶液加入3.6~4.2μg抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體，反應時間為10min。

4.如權利要求1-3任一項的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（2）中調節pH值所用溶液為錫酸鉀溶液，用錫酸鉀溶液將膠體金溶液pH值調至5.5~6.0；

錫酸鉀溶液制備方法為稱取2g錫酸鉀，室溫溶于100mL超純水，用0.22μm濾膜過濾，4℃保存備用。

5.如權利要求1-3任一項的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（1）中膠體金溶液為采用檸檬酸三鈉還原法制備的萬分之二的納米金。

6.如權利要求1-3任一項的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（1）中膠體金溶液的制備方法為：

氯金酸溶液：將10g氯金酸溶于超純水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存備用；

檸檬酸三鈉溶液：稱取1g檸檬酸三鈉，室溫溶于100mL超純水，用0.22μm濾膜過濾， 4℃保存備用；

將2mL氯金酸溶液和98mL超純水加入三口燒瓶中，加熱至沸騰，然后加入4.5mL檸檬酸三鈉溶液，待燒瓶內液體由藍紫色變為酒紅色，反應20min，冷卻后室溫避光保存備用。

7.如權利要求1-3任一項的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：步驟（4）中封閉劑和穩定劑為BSA溶液和PEG20000溶液，先加入穩定劑PEG20000溶液，每100mL膠體金溶液加入1mLPEG20000溶液，再加入封閉劑BSA溶液，每100mL膠體金溶液加入1mLBSA溶液。

8.如權利要求7的標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的方法，其特征在于：BSA溶液制備方法為稱取10gBSA，室溫溶于100mL超純水，4℃存放，現用現配；PEG20000溶液制備方法為稱取10gPEG20000，室溫溶于100mL超純水，4℃存放，現用現配。

9.一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的試劑條，其特征在于：試劑條制備方法如下：

（1）膜的包被

包膜稀釋液配方：0.01MPB，pH7.4，質量百分比濃度為0.05%海藻糖，將檢測線和質控線從下至上依次包被于NC膜上；

（2）膠體金墊的制備

制備出膠體金溶液，然后分別按常規方法和如權利要求1-8任一項的方法標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體；標記完成后離心，用金復溶液濃縮，均勻鋪于玻璃纖維上，放烘房烘24小時成膠體金墊；

（3）樣品墊的處理

樣品墊處理液配方：0.1MPBS，pH7.4，質量百分比濃度為0.1%蔗糖，質量百分比濃度0.1% BSA，質量百分比濃度0.5% Tween-20，質量百分比濃度0.5% Triton X-100，質量百分比濃度0.1% NaN₃；將處理液均勻地涂布到玻璃纖維上，放烘房烘24小時，制成樣品墊；

（4）試劑條的組裝

將吸水紙、NC膜、膠體金墊、樣品墊、PVC底板按順序組裝后裁切成試紙條。

10.一種標記抗間日瘧原蟲pLDH單克隆抗體的試劑盒，其特征在于：試劑盒包括檢測卡和樣本稀釋液，檢測卡包括相互扣合的卡體和卡蓋，卡體和卡蓋之間具有權利要求9的試紙條。