[發明專利]一種檢測蜜蜂急性麻痹病毒的引物組和探針與應用及其檢測方法

在審

• 申請號: 202110241403.5
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN112853003A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 張體銀;李丹丹;王武軍;田國寧;張志燈;于師宇
• 申請（專利權）人: 福州海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

1.一種檢測蜜蜂急性麻痹病毒的引物組和探針，其特征在于，包括上游引物ABPV-F、下游引物ABPV-R及TaqMan探針ABPV-P；所述上游引物ABPV-F的序列如：SEQ ID NO.1所示；所述下游引物ABPV-R的序列如：SEQ ID NO.2所示；所述TaqMan探針ABPV-P的序列如：SEQ IDNO.3所示。

2.根據權利要求1所述的引物組和探針，其特征在于，所述TaqMan探針ABPV-P的5'端采用熒光基團ROX進行修飾，3'端采用BHQ1進行修飾。

3.一種權利要求1或2所述的引物組和探針擴增得到的目的片段，其特征在于，所述擴增得到的目的片段的大小為191bp，序列如SEQ ID NO.4所示。

4.一種權利要求1或2所述的引物組和探針在制備檢測蜜蜂急性麻痹病毒產品方面的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述檢測蜜蜂急性麻痹病毒產品為試劑盒。

6.一種非疾病診斷目的檢測蜜蜂急性麻痹病毒的方法，其特征在于，采用實時熒光RT-PCR進行檢測。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述實時熒光RT-PCR的反應體系包括如下組分和含量：2×One Step RT-qPCR Buffer 10μL，5U/μL DNA聚合酶0.4μL，5U/μL逆轉錄酶0.4μL，10μmol/LABPV-F/R各0.8μL，10μmol/LABPV-P 0.6μL，RNA模板1.0μL，RNase-freeH₂O 6μL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述實時熒光RT-PCR的反應程序為：42℃5min；95℃30s；95℃5s，63℃30s，40個循環。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述63℃為單點熒光檢測。

10.根據權利要求6～9任意一項所述的方法，其特征在于，所述檢測結果的判定標準為：在實驗有效的情況下，樣品無Ct值且無擴增曲線，表示樣品中不含蜜蜂急性麻痹病毒；待測樣品Ct值≤35，且出現典型的擴增曲線，表示樣品中含有蜜蜂急性麻痹病毒；待測樣品Ct值＞35，則對該樣品重復檢測，重復檢測結果無Ct值則該樣品不含蜜蜂急性麻痹病毒；重復檢測結果有Ct值則該樣品中含有蜜蜂急性麻痹病毒；

所述實驗有效的情況為：陰性對照無Ct值且無擴增曲線，同時陽性對照Ct值≤35，并且出現典型的擴增曲線，說明實驗為有效實驗。