[發明專利]一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法

在審

• 申請號: 202110240210.8
• 申請日: 2021-03-04
• 公開（公告）號: CN113049726A
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 馮振;景葉松;弭兆元
• 申請（專利權）人: 山東英盛生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 孫維傲

本發明提供一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法，所述免疫抑制藥物為依維莫司和西羅莫司，其特征在于，所述方法包括對全血樣品進行提取后采用HPLC?MS法檢測分析，其中，提取液為三氟醋酸和氟化銨的甲酸溶液。本發明的方法解決了現有或常規方法采用有機溶劑蛋白沉淀提取藥物在上機檢測過程中對人員和環境產生危害、儲存和回收成本高，以及提取藥物信號和靈敏度低的問題，尤其對免疫抑制劑藥物中的依維莫司和西羅莫司信號低達不到檢測要求的問題，并且本發明的方法線性良好可行性高。

技術領域

本發明涉及血藥監測技術領域，具體涉及一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

依維莫司和西羅莫司屬于免疫抑制劑類藥物，主要用于抗器官移植排斥反應，還可應用于治療某些自身免疫性疾病，臨床應用較廣。由于免疫抑制劑類藥物在人體中生物利用度個體差異大，血藥濃度與療效及毒性密切相關，且血藥濃度易被多方面因素影響。因此，定時對患者體內依維莫司和西羅莫司的血藥濃度監測，制定個體化給藥方案，對提高器官移植的存活率，促進免疫抑制劑類藥物在臨床的合理應用具有重要的臨床意義。

目前臨床或實驗室診斷方法有熒光偏振免疫法、化學發光微粒子免疫檢測法、高效液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜-紫外檢測法、均相酶免疫法等，其中HPLC-MS方法越來越受到關注。樣本預處理簡單，樣品需要量少，不需水解及衍生化，是臨床常規檢測的理想選擇方法。其中依維莫司和西羅莫司等藥物在人體中參考范圍較低，檢測信號低，部分文獻采取簡單的有機溶劑蛋白沉淀法，部分文獻報道采取萃取方法，操作方法復雜費時。

血液樣本成分復雜，含有大量的內源性大分子，使得分析結果易受基質效應的影響，因此在分析前需要對樣本進行適當地預處理，將待測組分從生物樣本基質中分離出來，以降低基質效應的影響。

簡單的有機溶劑蛋白沉淀并不能完全去除雜質，且長期使用有機溶劑有一定毒性，易對操作人員和環境造成不可逆性損害，且有機溶劑的使用、回收和存儲都比較麻煩，增加了檢測成本；在進行定量分析時，雜質的存在嚴重影響檢測結果的準確性。而過于復雜的提取方法如液相、固相萃取技術操作繁瑣，且檢測成本過高，不適合市場化大規模推廣。因此樣本提取技術就成為提高分析測定效率、改善和優化檢測分析的重要環節。

發明內容

為了改善現有技術的不足，本發明提供了一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法，解決了現有或常規方法采用有機溶劑蛋白沉淀提取藥物在上機檢測過程中對人員和環境產生危害、儲存和回收成本高，以及提取藥物信號和靈敏度低的問題，尤其對免疫抑制劑藥物中的依維莫司和西羅莫司信號低達不到檢測要求的問題，并且本發明的方法線性良好可行性高。

具體地，本發明提供了下述的技術特征，以下技術特征的一個或多個的結合構成本發明的技術方案。

在本發明的第一方面，本發明提供了一種檢測全血中免疫抑制劑藥物的方法，所述免疫抑制藥物為依維莫司和西羅莫司，其中，所述方法包括對全血樣品進行提取后采用HPLC-MS法檢測分析，其中，提取液為三氟醋酸和氟化銨的甲酸溶液。

在本發明的實施方式中，本發明的提取液不會使樣品立刻沉淀為一團，而是呈現出蓬松絮狀、利于渦旋混勻，而且縮短渦旋混勻時間，使得提取更為充分，能夠有效去除雜質，降低基質效應，增強待測物質的離子化效率，有效提高依維莫司和西羅莫司的信號。尤其是，經過優化，發明人發現提取液中三氟醋酸體積分數為0.01-0.05％，氟化銨的濃度為0.1-0.5mM，三氟醋酸體積分數優選為0.025％，氟化銨的濃度優選為0.4mM時效果較優，在本發明的一些實施方式中，相較于常規的提取方法，比如加入乙腈/硫酸鋅沉淀劑，使用本發明的提取液可使得分析物西羅莫司的峰面積至少提升5.9倍，依維莫司的峰面積至少提升6.5倍。